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DMEM high glucose medium
DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,含丙酮酸钠,含HEPES)培养条件:
完全培养基:DMEM高糖培养基90%;胎牛血清10%。
培养条件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,含丙酮酸钠,含HEPES)制备:
1. 分离和培养宿主细胞;
2. 通过病毒介导或者其它的方式将多能性相关的基因导入宿主细胞;
3. 将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并在ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养期间根据需要加入相应的小分子物质以促其重编程;
4. 出现ES样克隆后进行IPS细胞的鉴定(细胞形态、特定基因的表达、表观遗传修饰、体外分化潜能等方面)。
细胞生长:贴壁生长
细胞形态:上皮样;多角形
细胞传代:1:2-1:4传代;每周2-3次
DMEM高糖培养基 (含L谷氨酰胺,含丙酮酸钠,含HEPES)传代方法:
收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
一.如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
二.如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次
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文献和实验细胞培养基成分复杂,包括盐类、糖类、维生素、氨基酸、代谢前体、生长因子、激素和微量元素。对这些物质的需求因细胞而有差异,这也导致大量的不同培养基配方出现。主要碳源物质通常是葡萄糖,有时也会使用半乳糖代替,这是因为半乳糖的代谢速度较慢。氨基酸(尤其是 L - 谷氨酰胺)和丙酮酸盐也可作为碳源。除了营养成分,培养基也会帮助维持培养体系的 pH 和渗透压。pH 的维持依靠一种或多种缓冲液体系,最常见的包括 CO2/NaHCO3、磷酸盐和 HEPES 等,血清也可以作为完全培养基的缓冲液(文章末尾会送
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氨基酸 氨基酸是组成蛋白质的基本单位.不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸.其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡.因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺.但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培养液内.已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周
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