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1
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上海信裕
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Go 6976 Very potent protein kinase C inhibitor
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液,10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶(预热20分钟左右)2ml消化,轻轻摇晃,Go 6976 Very potent protein kinase C inhibitor直至肉眼见单层细胞呈块状脱落(或在显微镜下观察细胞之间分离),立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化,轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清,加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中,每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液,正常情况下2-3天就可以长满,期间不用换液。
Go 6976 Very potent protein kinase C inhibitor的传代方法:首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%,不需要长满,就准备传代。倒掉旧的培养基,再用已经高压灭菌过的PBS洗1-2次,我用的是25平方厘米的培养瓶,加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤,再用一次性过滤器过滤除菌,Go 6976 Very potent protein kinase C inhibitor再分装成1ml的小包装,刚好每次用完一个,避免每次反复冻存,会使胰酶的活性下降),加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化,一旦发现细胞开始变园收缩,大约1-3分钟时间,必要时可以吹打帮助细胞分散,就立即加入培养基中和胰酶,如有EDTA最好要离心(800rpm,5min),弃上清夜,Go 6976 Very potent protein kinase C inhibitor再加入完全培养基吹匀,再分瓶,一般一瓶可以分2-3瓶。放入5%的CO2培养箱,37度培养24小时后观察。
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文献和实验Protein Kinase C as a Modulator of 5- HT1A and Dopamine- D2 Receptor Signaling
Since its identification as a family of protein kinases that is activated in the presence of calcium, phosphatidyl serine, and diacylglycerol (DAG), protein kinase C (PKC) has been regarded as one of the early steps in receptor signaling
C), Roche # 11 017 101 001 Aprotinin 10 mg/mL in PBS (5000-160,000x, aliquot and store -20°C), Roche # 10 981 532 001 PMSF: (phenylmethylsulfonyl flouride, 100x) 0.2 M in ethanol. Store at 4°C. 100x Phosphatase inhibitor mix (store -20ºC
Purification of Myosin Light Chain Kinase
inhibitor* - 8ml of 1mg/ml stock solution pH 7.0 3.Buffer B DE 52 Wash 10 mM MOPS- 20ml of 2M stock solution 4 liters 1 mM EDTA- 20ml of 0.2M stock solution 1 mM DTT* - 4ml of 1M stock solution 0.1 mM PMSF* - 7ml of 10mg/ml stock solution pH
技术资料暂无技术资料 索取技术资料





