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RPMI 1640 medium
MEM培养基 (含Earle平衡盐)培养条件:
完全培养基:DMEM高糖培养基90%;胎牛血清10%。
培养条件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
MEM培养基 (含Earle平衡盐)制备:
1. 分离和培养宿主细胞;
2. 通过病毒介导或者其它的方式将多能性相关的基因导入宿主细胞;
3. 将病毒感染后的细胞种植于饲养层细胞上,并在ES细胞专用培养体系中培养,同时在培养期间根据需要加入相应的小分子物质以促其重编程;
4. 出现ES样克隆后进行IPS细胞的鉴定(细胞形态、特定基因的表达、表观遗传修饰、体外分化潜能等方面)。
细胞生长:贴壁生长
细胞形态:上皮样;多角形
细胞传代:1:2-1:4传代;每周2-3次
MEM培养基 (含Earle平衡盐)传代方法:
收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
一.如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
二.如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次
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