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文献和实验水研磨成匀浆,转移到 离心管 中,再用6mL 蒸馏水分次洗涤研钵,洗涤液收集于同一 离心管 中,放置0.5~1h 以充分提取,然后在4 000r/min 离心20min,弃去沉淀,上清液转入10mL 容量瓶,并以蒸馏水定容至刻度,即得待测样品提取液。 (2)测定:另取2 支10mL 具塞 试管 ,按下表取样。吸取提取液0.1mL(做一重复),放入具塞刻度 试管 中,加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白
复合物与糖反应, Cu 生成氧化亚铜( Cu 2 O )。 (2) 氧化亚铜在酸性条件下,可将钼酸铵还原,还原型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用,生成一种蓝色复合物即砷钼蓝,其颜色深浅在一定范围内与还原糖含量(即被还原的 Cu 2 O 量)成正比,用标准葡萄糖与砷钼酸作用,比色后用做标准,就可测得样品中还原糖含量。 三、仪器、试剂和材料 1 .仪器 ( 1) 分光光度计 ( 2 )水浴锅 (3 )具塞刻度试管: 15ml X 10 ( 4 )吸管: 1ml X 1 , 2m1X
细胞计 方法: 1、悬浮细胞的染色: (1)收获正常和诱导凋亡的细胞(0.5~1′106),PBS洗2次,1000rpm′10min。 (2)3%多聚甲醛冰浴10min,PBS洗2次,1000rpm′10min。 (3)加入PBS-T溶液,37°C孵育15min,PBS洗2次,1000rpm′10min。 (4)加入200ml胎牛血清,室温反应30min。 (5)加入5ml FITC标记的TFAR19单抗(终浓度为1:40),4℃反应30min (6)荧光细胞洗液洗2次,1000rpm′10
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