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艾美捷科技有限公司
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1 Kit
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文献和实验yan0495 R&D公司的recombinant human EGF Receptor来源于DNA编码的人类EGFR的胞外区,而酪氨酸激酶活性区在胞内,我现在需要做酪氨酸激酶抑制剂的筛选,不知道能不能用这个蛋白?筛选原理: 以多聚酪氨酸多肽为底物,用EGFR催化酪氨酸的磷酸化,用酶标记的单克隆抗体检测酪氨酸磷酸化程度,以OPD做为辣根过氧化物酶底物显色,从而筛选EGFR抑制剂。附上EGFR说明书和图。 请各位指点啊! yan
[3] 将细胞裂解物分离成 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶性组分,发现在两个组分中都可以检测到 TDP-43 的磷酸化片段。同样的,用 RIPA 缓冲液裂解小鼠 MEC 细胞时,磷酸化的 EGFR(pY-1068 EGFR)只在 RIPA 可溶性组分中检测出。然而,磷酸化的 c-Src(pY-416 c-Src)则在 RIPA 可溶性和 RIPA 不可溶组分中都能检测出, 甚至 WT 样品在 RIPA 不可溶组分中的信号比 RIPA 可溶性组分中更强(下图),结果表明如果仅使用 RIPA 可溶性组分
范围,同时具有很好的磷酸化特异性,才不会导致假阴性结果的产生。 以Liu的研究为例,他们就使用了通用型的抗酪氨酸磷酸化抗体4G10和PY20,利用Western Blot技术来验证其通过多肽芯片筛选出的多肽结果。他们的实验室是这样设计的,首先利用磷酸化酪氨酸的多肽芯片(phospho-tyrosine peptide array)来筛选与SH2结构域结合的磷酸化多肽序列,然后对这些合成的多肽序列进行Western Blot验证,利用通用型的抗酪氨酸磷酸化抗体4G10和PY20检测其磷酸
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