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北京鼎国
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箱
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文献和实验振荡器,分光光度计,微量移液器,电炉(或微波炉),离心管,烧杯,量筒,三角瓶等。 3材料 总RNA样品或mRNA样品,探针模板DNA(25 ng),尼龙膜 4试剂 NorthernMax Kit(Cat. # 1940,Ambion, Inc.),琼脂糖,DEPC, X光底片,底片暗盒,Random Primer, dNTP Mixture,111TBq/mmol,[a-32P]dCTP,Exo-free Klenow Fragment和10 X
水研磨成匀浆,转移到 离心管 中,再用6mL 蒸馏水分次洗涤研钵,洗涤液收集于同一 离心管 中,放置0.5~1h 以充分提取,然后在4 000r/min 离心20min,弃去沉淀,上清液转入10mL 容量瓶,并以蒸馏水定容至刻度,即得待测样品提取液。 (2)测定:另取2 支10mL 具塞 试管 ,按下表取样。吸取提取液0.1mL(做一重复),放入具塞刻度 试管 中,加入5mL 考马斯亮蓝G-250 蛋白
药物的介质,而加药组加入不同浓度的药物。8.避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时,高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加,会试验敏感性。因此,一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后,尽量吸净培养孔内残余培养液。实验步骤贴壁细胞:1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。2.5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可
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