0.2ml 薄壁PCR管(平盖),紫色,5000/箱 1

DNA测序技术

凝胶，一般6%～8%的胶浓度可获得较好的结果。配制过程中，先用适量双蒸水溶解尿素，再加入Acr&Bis和10×TBE缓冲液，再用双蒸水调终体积至99.2ml，并用0.45mm的滤膜过滤，然后加过硫酸铵和TEMED。溶解尿素时不必加热。如果确需加热则应等溶液完全冷却后，方可加入TEMED和过硫酸铵。一般在胶灌制后4～6分钟，即开始聚合，如果聚合不好，则应使用高浓度的TEMED和过硫酸铵。  （3）胶配制好后，即可灌制胶板。一般是将凝胶沿着压条边缘缓慢地倒入玻璃板的槽中，倒完后，静止放置使之聚合

【旧贴整理】花了2星期系统归纳关于PCR的各位老师旧帖,与大家分享 --PCR

把酶放到最后加，否则他们有可能把引物都折磨得面目全非。2》、混合加样若做多管的PCR，可先加一起，再用枪分取比如要做n管，就把除模板之外的其他部分按照n+1份配好，然后再分装，如：10 x buffer 5uldNTP 4ul引物1 1ul引物2 1ultaq酶 1ulddw 34ul模板 2ul共有9个模板，就把除模板外的其他成分乘10，即buffer50ul，dNTP 40ul ，引物1 10ul，引物2 10ul，taq酶10ul，ddw 340ul，加到一个离心管中，加盖，用力振荡使混匀

分子实验方法10:测序技术

)。 （10）95%乙醇。 （11）0.5%冰乙酸。 （12）Sigmacote (Sigma CAT. #SL-2)。 五、操作步骤： 成功地使用银染测序系统需要对提供的操作方法进行仔细考虑。银染不如放射性检测法灵敏，而需要更多的模板量，此外，也不可能通过延长X-光胶片曝光时间的方法增加信号强度。因此，请使用推荐的DNA 模板量，每次均使用所提供的对照检查系统的可靠性，并且注意如下几点： （1） DNA 的浓度和纯度必须经过琼脂糖凝胶电泳或荧光法测定，样品应