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HYPOTONIC LYSIS BUFFER
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大量
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上海瑶韵生物
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M334-100ML
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AMRESCO产品介绍: 产品服务于生物科研,包括分子生物学,蛋白组学,细胞生物学等领域;电泳,检测,细胞培养等技术。
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文献和实验ahuchxq 最近提NF-kB的核蛋白,是买的碧云天的试剂盒。一般提核蛋白都是有两个buffer,一个低渗的提胞浆蛋白,一个是高盐的提核蛋白的缓冲液,我想问的是,有没有可以不加核蛋白的buffer 直接把胞浆蛋白提取来后,直接加SDS 裂解液裂解上样做的? 谢谢大家提供点信息。。。 fangweibin119 ahuchxq wrote: 最近提NF-kB的核蛋白,是买的碧云
获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解 30 min,细胞裂解液于 4 ℃,最大转速离心 30 min 后取上清; 取少量裂解液以备 Western blot 分析,剩余裂解液加 1 μg 相应的抗体加入到细胞裂解液,4 ℃ 缓慢摇晃孵育过夜; 取 10 μl protein A 琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗 3 次,每次 3 000 rpm,离心 3 min; 将预处理过的 10 μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中 4 ℃ 缓慢摇晃孵育
样本准备 蛋白提取 所需仪器:匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF(蛋白酶抑制剂)、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子,消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液:PMSF=100:1。 1) 组织处理:首先用酒精棉消毒剪刀和镊子,取适量的组织于匀浆器中,用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。(含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆) 2) 细胞处理: A、 贴壁细胞处理:去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
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