TRAP－银染法端粒酶活性检测试剂盒

TRAP法端粒酶活性检测实验操作方法及疑难解答

的PCR端粒酶活性检测试剂盒基于同样的的原理，利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6bp 的梯状条带，条带的多、寡、深或浅表示端粒酶活性的大小。TRAP-银染法保留了传统TRAP 法灵敏度高、特异性强等优点，避免了同位素的放射污染。同时，还增设了内标准物，提供阳性对照品，优化了引物设计，使PCR效果进一步提高，使之能够高灵敏的检测到细胞和组织提取物中端粒酶的活性。 TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂实验方法 试剂盒组份 组分 50 次实验量

基于质谱的蛋白质鉴定，第6节：MALDI-TOF-MS蛋白和肽样品的制备

质胶样质谱鉴定过程中，多肽的回收是一个问题。如下图所示，将胶样中同样的20 ng兔骨骼肌肌动蛋白用不同的染色法进行染色：常规银染色（无戊二醛）与锌-咪唑锌阴性染色法。染色后，用胰蛋白酶在凝胶中对蛋白质进行消化，磁珠法对样品进行浓缩，用MALDI-MS进行蛋白质谱鉴定。结果发现，与阴性染色的蛋白质相比，蛋白质的银染色导致胰蛋白酶肽的回收率降低（比较图中左右两边肽的S / N比率）。该影响可通过去除蛋白质染色过程中银染试剂的方式消除。 图注：20 ng (500 fmol)兔骨骼肌肌动蛋白经胰酶

端粒酶活性检测操作必知

4.2 排除假阴性 (1)以阳性细胞沉淀(106细胞)的裂解提取液为阳性对照进行TRAP分析可以排除由于试剂质量不好造成的假阴性。(2)组织提取液中Taq酶抑制物的存在会造成假阴性，为此Wright等加入一个150bp的内标准。内标准的获得方法如下：设计TS加长引物：5′-AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTC-3′和CX加长引物：5′-(CCCTTA)3CCCTAATAGGCGCTCAATGTA-3′，分别在TS和CX引物的3′端增加15个碱基，可与编码鼠肌蛋白的97～