超微量ATP酶测试盒说明书

超微量ATP酶测试盒说明书

Na⁺k⁺ -ATPase（HY-60078)KIT

一、 测定意义

ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用，机体在缺氧及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。

二、测定原理：

ATP酶可分解生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。

三、超微量ATP酶测试盒说明书试剂组成与配制：（50管/25样）

试剂一： 液体13ml×1瓶。2-8℃保存6个月（注意防止霉变，长时间不用可冷冻保存）。

试剂二：液体4ml×1瓶。2-8℃保存6个月。

试剂三：粉剂×4支，用时每支加蒸馏水1ml，混匀，充分溶解。（用不完-20℃以下保存一周）。

试剂四：液体5ml×1瓶。室温或2-8℃长期保存。

试剂五：甲液7ml×4瓶，乙液6ml×4瓶，2-8℃保存，防止磷污染。

注：乙液在冬天或2-8℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，老师可以将其放入60℃左右水浴10分钟即可以完全溶解。

试剂六：液体50ml×1瓶，室温长期保存。

试剂七：10mmol/L标准磷储备液5ml×1瓶。2-8℃避光保存。

试剂十：储备液0.1ml×3支，稀释液0.9ml×3支，用时取一支稀释液加入一支储备液中（将储备液打开前，将溶液全部弹到管底），用不完的2-8℃保存。

0.1umol/ml标准磷应用液配制：用时将储备液100倍稀释，即取10umol/ml的储备液0.1ml加蒸馏水至10ml。

0.02umol/ml磷标准液配制：用时将0.1umol/ml磷标准液用蒸馏水5倍稀释，即取0.1umol/ml磷标准液1ml加蒸馏水4ml。

基质液的配制：按试剂一：试剂二：试剂三=260：80：80比例混合。每只管子需加420ul。需多少配多少，现用现配。

显色剂的配制：用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已经预温好的试剂五乙液中，充分混匀，2-8℃保存，配好的显色剂量够做13个管子（如果你的样本量很少，所需的显色剂量较少，那么你可以按试剂五中的甲液：乙液=7：6的比例自行配制显色剂，需多少配多少（按比例配制显色剂时要防止磷污染，最好用专用吸嘴）,配好的显色剂2-8℃条件下至少可保存5天。

四、超微量ATP酶测试盒说明书试剂组成与配制：（100管/50样）

试剂一： 液体13ml×2瓶。2-8℃保存6个月（注意防止霉变，长时间不用可冷冻保存）。

试剂二：液体4ml×2瓶。2-8℃保存6个月。

试剂三：粉剂×8支，用时每支加蒸馏水1ml，混匀，充分溶解。（用不完-20℃以下保存一周）。

试剂四：液体5ml×2瓶。室温或2-8℃长期保存。

试剂五：甲液7ml×8瓶，乙液6ml×8瓶，2-8℃保存，防止磷污染。

注：乙液在冬天或2-8℃长时间保存时可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，老师可以将其放入60℃左右水浴10分钟即可以完全溶解。

试剂六：液体50ml×2瓶，室温长期保存。

试剂七：10mmol/L标准磷储备液5ml×1瓶。2-8℃避光保存。

试剂十：储备液0.1ml×6支，稀释液0.9ml×6支，用时取一支稀释液加入一支储备液中（将储备液打开前，将溶液全部弹到管底），用不完的2-8℃保存。

0.1umol/ml标准磷应用液配制：用时将储备液100倍稀释，即取10umol/ml的储备液0.1ml加蒸馏水至10ml。

0.02umol/ml磷标准液配制：用时将0.1umol/ml磷标准液用蒸馏水5倍稀释，即取0.1umol/ml磷标准液1ml加蒸馏水4ml。

基质液的配制：按试剂一：试剂二：试剂三=260：80：80比例混合。每只管子需加420ul。需多少配多少，现用现配。

显色剂的配制：用时取一瓶试剂五甲液加入一瓶已经预温好的试剂五乙液中，充分混匀，2-8℃保存，配好的显色剂量够做13个管子（如果你的样本量很少，所需的显色剂量较少，那么你可以按试剂五中的甲液：乙液=7：6的比例自行配制显色剂，需多少配多少（按比例配制显色剂时要防止磷污染，最好用专用吸嘴）,配好的显色剂2-8℃条件下至少可保存5天。

一、超微量ATP酶测试盒说明书样本前的处理：

1.组织前处理：准确称取组织重量，按重量体积比制成10%的匀浆，再取一定量的10%的匀浆加9倍的生理盐水制成1%的组织匀浆，同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白。

(试剂本所有供应)。如果预试结果太高，在将1%的组织匀浆稀释成不同浓度再进行预试后再决定取样浓度。

1. 培养细胞前处理：

将培养细胞消化，离心，弃上清，留下层细胞，每管加0.2-0.3ml生理盐水或或匀浆介质制备成10⁶-10⁷/cm ³细胞悬液，即10⁶-10⁷/ml，再进行破碎。破碎细胞的方法有三种：1.用匀浆器匀浆。2.用超声粉碎器粉碎。3.反复冻融3此（第三种方法有时会影响酶活力）。制备好的细胞悬液不需要离心，同时用考马斯亮兰试剂测定组织蛋白（试剂本所有供应）。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度进行预试，根据预试结果决定取样浓度。

注意：在测试加样前要摇匀后取样。

不可用磷酸盐缓冲液或含磷的试剂作为样本匀浆介质或稀释样本

二、规范操作步骤：

1. 酶促反应： 单位（ul)

三、如果样本数量很多可以采用简便操作法：

1. 基质液的配制：见前面。需多少配多少，现用现配 单位（ul)

3. 定磷：（0.02umol/ml磷标准液及显色剂的配制见前面） 单位（ul)

注：在比色前，将比色皿用自来水冲洗10余次，再用蒸馏水冲洗4-5次，以免磷污染。

四、计算：

公式：组织中ATPase活力（U/mgprot）=（测定管OD值-对照管OD值）/（标准管OD值-空白管OD值）×标准管浓度（0.02umol/ml）×6*×7.8**÷匀浆蛋白含量（mgprot/ml）

6*：定义为每小时，试剂操作为10分钟反应；7.8**：反应体系中7.8倍稀释。

xyD880Ra 【中文名称】：大鼠胰岛素受体底物2(IRS2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Insulin ReHZptor Substrate 2 (IRS2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyQ090Ra 【中文名称】：大鼠细胞色素P450家族成员2C9(CYP2C9)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyQ092Ra 【中文名称】：大鼠细胞色素P450家族成员2C19(CYP2C19)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Cytochrome P450 2C19 (CYP2C19) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyD302Ra 【中文名称】：大鼠细胞色素P450家族成员2D6(CYP2D6)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Cytochrome P450 2D6 (CYP2D6) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyG192Ra 【中文名称】：大鼠N-乙酰转移酶2(NAT2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for N-AHZtyltransferaHZ 2 (NAT2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA439Ra 【中文名称】：大鼠蛋白激酶Cε(PKCε)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Protein KinaHZ C Epsilon (PKHZ) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyE189Ra 【中文名称】：大鼠前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Proprotein ConvertaHZ Subtilisin/Kexin Type 9 (PCSK9) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyB366Ra 【中文名称】：大鼠血管内皮钙黏蛋白(CDH5)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Cadherin 5 (CDH5) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyC241Ra 【中文名称】：大鼠端粒酶逆转录酶(TERT)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for TelomeraHZ ReverHZ TranscriptaHZ (TERT) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyG970Ra 【中文名称】：大鼠干扰素α13(IFNα13)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Interferon Alpha 13 (IFNa13) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyL638Ra 【中文名称】：大鼠JNK1/MAPK8关联膜蛋白(JKAMP)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for JNK1/MAPK8 Associated Membrane Protein (JKAMP) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyB106Ra 【中文名称】：大鼠肌球蛋白轻链激酶(MYLK)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Myosin Light Chain KinaHZ (MYLK) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyB852Ra 【中文名称】：大鼠含Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Rho Associated Coiled Coil Containing Protein KinaHZ 2 (Rock2) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA985Ra 【中文名称】：大鼠P-选择素糖蛋白配体1(PSGL1)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for P-HZlectin Glycoprotein Ligand 1 (PSGL1) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyC681Ra 【中文名称】：大鼠去甲肾上腺素转运蛋白(NET)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Norepinephrine Transporter (NET) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA421Ra 【中文名称】：大鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA934Ra 【中文名称】：大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Peroxisome Proliferator Activated ReHZptor Alpha (PPARa) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA925Ra 【中文名称】：大鼠多巴胺受体D4(DRD4)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Dopamine ReHZptor D4 (DRD4) 【灵敏度】：9.375pg/mL
xyA673Ra 【中文名称】：大鼠多巴胺受体D2(DRD2)ELISA试剂盒 【英文名称】：ELISA Kit for Dopamine ReHZptor D2 (DRD2) 【灵敏度】：9.375pg/mL