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文献和实验不完全:使用正常山羊血清或 1%~5% BSA 封闭 1h。 (5)离子相互作用造成的背景:降低抗体稀释液的离子强度。 (6)切片或细胞过于干燥或孵育温度过高:实验过程中请保持切片处于湿润状态,一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 (7)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (8)样本于缓冲液或抗原修复液中浸泡太久:样本在溶液中浸泡时间不要超过 24h。 Q4:为什么会出现非特异性染色,如何避免? (1)抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色:由于本试剂盒使用
SABC 法与其他免疫组织化学染色方法比较 SP法或SAP法 该法由于用链霉亲和素替代ABC法中的亲和素―生物素复合物,因此背景清晰,敏感性增加,无非特异性染色,阳性反应易于辨认。是目前最常用的方法。在操作步骤中,与SABC法相比,仅有一个步骤不同,即试剂盒中的链霉菌抗生物素―过氧化物酶替代了亲和素―生物 素―过氧化物酶。因此无需使用生物素阻断剂消除内源性生物素。SP法与SAP法的区别在于前者的放大系统为链霉亲和素―过氧化物酶,后者是链霉亲和素―碱性磷酸酶,故导致
,因为没有特定的阻断剂可以适用于所有的分析。每次检测时,HAMA阻断剂的最有效浓度也必须仔细滴定。对于给定的分析和干扰样品组合,必须进行非常严格的测试,才能找到合适的HAMA阻断剂。 此外,尽管干扰性抗体在相关文献中占主导地位,但在免疫分析中通常也会观察到许多其他类型的与抗体无关的干扰。除抗体干扰外,干扰也可能由样品中的内源性物质引起,例如由于分析物被封闭、交叉反应或一般基质效应,如高脂和高盐浓度、高粘度,这些类型的干扰在SARS-CoV-2免疫分析中也密切相关。许多内源性物质,如白蛋白、补体因子、溶血
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