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文献和实验:使用 Anti-phospho-Akt (Ser473) Rabbit mAb 对石蜡包埋的人乳腺癌组织进行免疫组织化学分析。(图 A)使用免疫组化试剂盒M&R HRP/DAB Detection IHC Kit,抗体 1:100 稀释;(图 B) 采用普通免疫组化试剂盒,抗体 1:25 稀释。 图 6 免疫组化实验检测 Erk1/2 表达 注:使用 Anti-Erk1/2 Mouse mAb与p44/42 MAPK (Erk1/2)Rabbit mAb 对正常小鼠心脏组织进行免疫
Polymer二抗进行了反应的放大,该方法敏感性较高,可缩短抗体孵育时间或降低抗体浓度。 (2)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (3)一抗导致的非特异性染色:多克隆抗体易于产生非特异性染色,结合抗体官网信息合理选择多克隆抗体或单克隆抗体。 (4)一抗种属来源与组织样本来源相同:如使用鼠源一抗检测小鼠组织,尽量选择种属来源与样本种属不同的一抗。 (5)切片或细胞过于干燥:实验过程中,需保持样本的湿润。 Q5:阳性染色细胞定位不正确,如何修正? (1)抗原修复条件不合理:尝试改变
基酸序列同源性较高,如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。 四、一抗宿主物种的选择 一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白
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