- ¥560
- Solarbio
- 北京
- R8290
- 2025年09月25日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
1年以上
- 英文名：
rProtein A Beads
- 库存：
大量
- 供应商：
索莱宝
- CAS号：
R8290
- 保存条件：
RT
- 规格：
2ml
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rProtein A Beads
货号：R8290 规格：5ml 保存：2-8℃ 产品介绍： Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白，主要通过Fc 片段结合哺乳动物IgG，但是不与狗lgG 结合，不结合人lgM、lgD 和IgA。蛋白A与蛋白G不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样，具体见表。天然Protein A有五个IgG 结合区域和一些未知功能的区域，重组protein A去除了与白蛋白及细胞表面结合位点，只含有五个IgG结合区域，减少了非特异性吸附。 rProtein A Beads 产品性能：
纯化流程： 1、Buffer 的准备 所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。 结合/ 洗杂Buffer: 0.15MNaCl，20mMNa2HPO4，pH7.0 洗脱Buffer: 0.1M甘氨酸，pH3.0 中和液： 1MTris-HCl，pH8.5 2、样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值，可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释，或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 3、样品纯化 1)将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱，层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。 2)将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中（保证目的蛋白与rProtein A Beads 充分接触，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。 3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。 4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer，收集洗脱液，即目的蛋白组分。 5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被细菌污染。 4、SDS-PAGE检测 将使用纯化产品得到的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。 填料清洗 rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生，但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，严重影响柱子的性能，这时需要对树脂进行清洗。 去除一些沉淀或变性物质 用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1%TritonX-100清洗，然后然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。 问题及解决方案
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文献和实验【原创】实验方法分享：用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗
很多免疫教科书上描述，人和兔子，还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。 但是在实际科研中，我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化 我和不少人说起过这个事，但是还是有很多怀疑和种种疑问 挑战经典理论确实是件难事 我摘抄了实验室一次实验与大家分享，希望对大家有所帮助 简单的实验步骤，适合没有层析仪，又希望快速得到抗体的实验室（此次纯化实验耗时约2小时）： 1，用binding buffer
【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。
[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然
单抗多为IgG，来源主要是腹水和混合瘤培养上清夜。腹水有大量白蛋白、转铁蛋白和宿主抗体等。Protein G和ProteinA对IgG的Fc区有专一性亲和作用，能一步醇化各种不同源的IgG。血清互补剂如小牛血清可先用蛋白G预处理，在培养前除去IgG。重组蛋白A介质rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的栽量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose Hp或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。 疏水层析pheny
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