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rProtein A Beads
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索莱宝
R8290
RT
2ml
rProtein A Beads
货号:R8290 规格:5ml 保存:2-8℃ 产品介绍: Protein A是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白,主要通过Fc 片段结合哺乳动物IgG,但是不与狗lgG 结合,不结合人lgM、lgD 和IgA。蛋白A与蛋白G不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样,具体见表。天然Protein A有五个IgG 结合区域和一些未知功能的区域,重组protein A去除了与白蛋白及细胞表面结合位点,只含有五个IgG结合区域,减少了非特异性吸附。 rProtein A Beads 产品性能:
纯化流程: 1、Buffer 的准备 所用水和Buffer在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。 结合/ 洗杂Buffer: 0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0 洗脱Buffer: 0.1M甘氨酸,pH3.0 中和液: 1MTris-HCl,pH8.5 2、样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 3、样品纯化 1)将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。 2)将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中(保证目的蛋白与rProtein A Beads 充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。 3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。 4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。 5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。 4、SDS-PAGE检测 将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。 填料清洗 rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生,但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,严重影响柱子的性能,这时需要对树脂进行清洗。 去除一些沉淀或变性物质 用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积的1%TritonX-100清洗,然后然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。 问题及解决方案
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温馨提示:不可用于临床治疗。
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