琼脂糖凝胶亲和层析介质 rProtein A

【原创】实验方法分享：用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗

很多免疫教科书上描述，人和兔子，还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。 但是在实际科研中，我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化 我和不少人说起过这个事，但是还是有很多怀疑和种种疑问 挑战经典理论确实是件难事 我摘抄了实验室一次实验与大家分享，希望对大家有所帮助 简单的实验步骤，适合没有层析仪，又希望快速得到抗体的实验室（此次纯化实验耗时约2小时）： 1，用binding buffer

【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。

[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然

分子生物学试验方法探讨三－如何选择凝胶

单抗多为IgG，来源主要是腹水和混合瘤培养上清夜。腹水有大量白蛋白、转铁蛋白和宿主抗体等。Protein G和ProteinA对IgG的Fc区有专一性亲和作用，能一步醇化各种不同源的IgG。血清互补剂如小牛血清可先用蛋白G预处理，在培养前除去IgG。重组蛋白A介质rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的栽量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose Hp或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。 疏水层析pheny