山羊IgG预装亲和柱

膜蛋白纯化攻略分享

1. 去垢剂类型和特点表 常用的去垢剂大概有十几种，根据膜蛋白分子量可选用下面两根预装柱进行快速筛选： 表 2. 用两根预装柱快速筛选去垢剂结果表   运行流速设为 0.5 mL/min，15 min 以内就可以筛选一个去垢剂，而且上样量 5-50μL，可节省样品。 标签 摸索得到合适的去垢剂之后，就可以进行常规的层析实验。 增溶之后，高速离心取上清过亲和层析柱，为了减少后续的处理步骤，往往设计较小的标签，一般使用 HIS 或者 Strep，如果使用 GST 标签，则需要引入酶切位点。   标签

最难搞的膜蛋白纯化攻略来了！

蛋白洗脱液； 浓缩后上样进行最后一步分子筛精纯，使用高分辨率层析柱 Superdex 200 Increase 10/300 GL，以得到高均一性和高纯度的 OmpA，利于后续的结构解析。   翻过膜蛋白纯化这座大山，以后纯化尽是坦途。 跃跃欲试了吗？那就去九大层析应用活动中先寻找心仪的装备吧！ Cytiva针对9种不同纯化应用，推出相应的层析组合产品，订购推荐的两步纯化或三步纯化套餐，即可获得精选填料或预装柱一份（52 种，任您选择），加速您的蛋白质研究！ 详情请查看

Western Blot实验准备与步骤

一、材料和方法1．试剂及耗材蛋白抽提试剂（改进型RIPA配方）BCA蛋白定量试剂盒5×还原样品缓冲液10×Tris-Glycine-SDS电泳缓冲液考马斯亮蓝染色液10×TBST pH8.0湿转缓冲液PVDF膜，0.22um孔径丽春红染色液PMSF蛋白酶抑制剂封闭液ECL发光液山羊抗兔IgG（H+L），HRP兔抗山羊IgG（H+L），HRPβ-actin 鼠单抗2．实验仪器Fresco低温冷冻离心机MultiSkan3酶标仪电泳槽湿转电泳槽电泳仪水平脱色摇床 二、 实验方法及结果3.1细胞