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青岛捷世康生物科技有限公司
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1
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4℃,避光,6个月
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2×50ml
福尔根DNA染色液
产品简介:
脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有 Feulgen 法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等,其中最经典的是 Feulgen 法, 该法是一种经典的酶组织化学法。
JSK Feulgen Stain 原理在于 DNA 经温和的弱酸(例如盐酸)水解后,嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开, 并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开, 在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与 Schiff 试剂结合,形成紫红色化合物,使细胞内含有 DNA 的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基(醌基是一个具有颜色的发色团0,所以凡含有 DNA 的部位就呈紫红色。该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键,因此 RNA用此法处理后则分解,所以该法不适用于证明 RNA。
操作步骤 (仅供参考)
(一) 石蜡切片染色
1、 组织固定:Carnoy 固定石蜡切片较好,10%福尔马林亦可,不宜采用 Bouin 固定液。
2、 配制弱酸工作液: 按弱酸溶液:蒸馏水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸馏水,充分混合,即获得弱酸工作液。
3、 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。
4、 入弱酸工作液,室温浸洗一下。
5、 切片入预热至 60℃的弱酸工作液,孵育 8min。
6、 切片入室温的弱酸工作液中冲洗 1min。
7、 蒸馏水冲洗。
8、 切片入 Schiff Reagent,室温暗处染色 30~60min。
9、 在上述染色过程中,配制 SO 2 水工作液。按弱酸溶液:亚硫酸盐溶液:蒸馏水=1:5:94 配
制,即取弱酸溶液 1 份、亚硫酸盐溶液 5 份、蒸馏水 94 份,充分混合,即配即用。
10、 用新鲜配制的 SO 2 水工作液洗切片 3 次,每次 90s。
11、蒸馏水中洗净。
12、经系列乙醇脱水。二甲苯透明并封片。
(二)冰冻切片染色
1、 冰冻切片预处理:取 1 份乙酸、3 份无水乙醇混合即为固定液,固定 10min。
2、 由无水乙醇脱水--逐级下行—蒸馏水。
3、 配制弱酸工作液:按弱酸溶液:蒸馏水=1:4 配制,即取 1 份弱酸溶液、4 份蒸馏水,充分混合,即获得弱酸工作液。
4、 余下步骤同上述石蜡切片染色。
染色结果:
细胞核内 DNA 红紫色
阴性对照: 将同样切片经上述步骤, 只有步骤 5 改为入室温弱酸工作液,孵育 15min。
结果为细胞核 DNA 阴性。
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文献和实验3. 苯酚品红溶液 碱性品红 11 g 无水酒精 100 ml 制法取上述溶液10 ml 与100 ml 5%的苯酚溶液混合,过滤备用。 4. 黑色素(nigrosin)溶液 水溶性黑色素10 g 蒸馏水 100 ml 称取10 g 黑色素溶于100 ml 蒸馏水中,置沸水浴中30分钟后,滤纸过滤 二次,补加水到100 ml,加0.5 ml 甲醛,备用。 五、荚膜染色液 1. 黑色素水溶液 黑色素 5 g 蒸馏水 100 ml 福尔马林(40
文献速递:Nature子刊发文揭示少量癌症 DNA 的突变检测新方法。
者们提出了一种基于对双酶消化产生的基因组区域的可重复随机子集进行测序,并随后对DNA样本进行片段大小选择的测序方案。在检测到的突变类型没有偏差的情况下,实现了体细胞突变检测的充分覆盖。将这种方案称为 mutREAD,用于检测少量 DNA(包括降解样本)的突变特征。研究表明,mutREAD 概括了全基因组测序识别的突变特征,最终将允许在更大的队列中研究突变特征,此外该测序方案对福尔马林固定石蜡包埋样本也具有很好的兼容性,能够在临床中发挥重要作用。 mutREAD中各步骤的示意图。( SB,样本
9) 1.黑色素水溶液 黑色素 5g 蒸馏水 100ml 福尔马林(40%甲醛) 0.5ml 将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。 2.番红染液 与革兰氏染液中番红复染液相同。 六、鞭毛染色液 (实验10) A液:单宁酸 5g FeCl3 1.5g 蒸馏水 100ml 福尔马林(15%) 2.0ml










