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miRNA定量
miRNA抽提及RT/探针设计及合成/上机分析检测
miRNA(microRNA)是一类内生的、长度约20 - 24个核苷酸的小RNA,是发夹结构的约70 - 90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成。其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNAs也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNAs的组合来精细调控某个基因的表达。随着miRNA调控基因表达的研究的逐步深入,将帮助我们理解高等真核生物的基因组的复杂性和复杂的基因表达调控网络。miRNA广泛存在于真核生物中,是一组不编码蛋白质的短序列RNA,其本身不具有开放阅读框(ORF)。成熟的miRNA,5′端有一个磷酸基团,3'端为羟基。编码miRNAs的基因最初产生一个长的pri-RNA分子,这种初期分子还必须被剪切成约70 - 90个碱基大小、具发夹结构单链RNA前体(pre-miRNA)并经过Dicer酶加工后生成。成熟的miRNA 5'端的磷酸基团和3'端羟基则是它与相同长度的功能RNA降解片段的区分标志。这些分子能够与那些和它的序列互补的mRNA分子相结合,有时候甚至可以与特定的DNA片断结合。这种结合的结果就是导致基因的沉默。这种方式是身体调节基因表达的一个重要策略。据推测,miRNA调节着人类三分之一的基因。
对于检测较少几种miRNA的表达差异通常采用Real-Time PCR的来对miRNA进行检测,其具有快速、特异性强、灵敏度高等优点。
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