阿尔茨海默科研用检测试剂盒，Human Amyloid be

阿尔茨海默科研用检测试剂盒，Human Amyloid beta (aa1-42)  ELISA Kit

人淀粉样蛋白β (aa1-42) ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL202
适用于定量检测天然和重组人淀粉样蛋白β (aa1-42)的浓度
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

背景
淀粉样β肽（Amyloid beta-peptides , Aβ）是淀粉样蛋白前体蛋白（Amyloid Precursor
Protein,APP）的蛋白水解片段，它们成纤维的形成在阿尔茨海默氏病病理学中起着不
可或缺的作用。Aβ纤维是老年痴呆症患者脑内老年斑的主要蛋白质成分。缺氧、脑外伤
和慢性炎症会增加淀粉样蛋白斑块的积累（1, 2）。Aβ还直接对神经元发挥多种影响（1，
3）。APP 是一种多功能跨膜蛋白，由一个 682 氨基酸(amino acid ,aa)的胞外结构域
(extracellular domain,ECD)、一个 24 aa的跨膜区段和一个 47 aa的胞浆结构域组成。
其 ECD 包含两个肝素结合结构域、一个铜结合结构域、一个 BPTI/Kunitz 抑制剂结
构域和一个胶原蛋白结合结构域。替代剪接产生多种异构体，包括最常见的 APP695、
APP751 和 APP770，这些异构体在 ECD 中含有各种缺失或替换。Aβ 肽序列从细胞
外并膜区延伸到跨膜区。APP 可在多个位点发生蛋白水解，从而产生或不产生 Aβ。在
非淀粉样蛋白生成途径中，APP的ECD被Aβ序列内的β-分泌酶（ADAM10）裂解脱落，
从而阻止了Aβ肽的形成（4）。在淀粉样蛋白生成途径中，APP 在 Aβ 序列的 N 端
被β-分泌酶活性（BACE）裂解（5、6）这会释放出一个稍短的 ECD 片段，即 APPbeta。
淀粉样变性 ECD 脱落后，γ-分泌酶/早老素 蛋白复合物对剩余部分进行膜内裂解，生
成 Aβ 肽 1-40 或 1-42（7-9）。这些肽的长度分别为 40 和 42 aa，其 N 端残基均
为 Asp672。在CSF中，Aβ1-40相对丰富，而Aβ1-42更疏水，更容易聚集，并且与阿
尔茨海默氏病的病理密切相关（1，10）。Aβ 1-40 在脑脊液（cerebrospinal fluid ，
CSF）中含量相对较高，而 Aβ 1-42 疏水性更强，更容易聚集，与阿尔茨海默病的病
理变化关系更为密切（1, 10）。人类Aβ 1-40与小鼠和大鼠Aβ 1-40有93%的氨基酸相
同性。γ-分泌酶裂解还释放出细胞内结构域（AICD)，该结构域可转位至细胞核并调节
多种基因的转录 (11)。APP ECD 的可溶性片段会释放到CSF、脑间质、血浆和尿液中
（12-15）。它们可被进一步裂解，生成 35 kDa 的片段，与受体 DR6 结合，引发轴
突修剪和神经变性（16）。
Aβ肽可在细胞内结合成二聚体、高阶寡聚体和不溶性纤维（17-19）。它们会增强 Tau
的过度磷酸化和神经纤维缠结的形成，这是阿尔茨海默病的另一个特征（20）。Aβ 还
会与载脂蛋白形成纤维，并与朊病毒蛋白 PrP(C) 结合（21，22）。在各种形式的 Aβ
中，低聚物在损害认知功能、抑制海马神经元的长期增强作用（long term potentiation ，
LTP）和诱导神经元氧化应激方面的作用最强（17、23、24）。相反，单体 Aβ 对兴
奋性毒性神经元细胞死亡具有保护作用（25）。Aβ 可直接破坏神经元膜的完整性（26）。
体内糖化或焦谷氨酰化会增加 Aβ 的神经毒性（27，28）。Aβ 与 RAGE 的相互作用
诱导神经元线粒体功能障碍、氧化应激、星形胶质细胞和小胶质细胞的炎症激活，以及
循环 Aβ 穿过血脑屏障进入大脑（29-31）。Aβ还会通过与 TLR2 的相互作用诱发神
经炎症（32）。细胞外 Aβ 可被脑啡肽酶或 胰岛素溶酶/胰岛素降解酶降解，阿尔茨海
默氏症患者的Aβ清除能力受损（33-36）。

Aβ肽直接作用于几种神经递质受体，APP的代谢受这些受体活性的调节。Aβ可结合并
激活乙酰胆碱α7受体，从而产生神经保护作用，增强突触可塑性和记忆形成，并上
调乙酰胆碱酯酶（37-39）。然而Aβ激活NMDA和AMPA受体会导致线粒体功能障碍和
神经元凋亡（40）。Aβ可抑制毒蕈碱受体激活时多巴胺和GABA的释放（41）。APP
的非淀粉样蛋白生成处理由多种触发因素诱导，包括神经肽P物质或毒蕈碱、、嘌
呤能、血清素、NMDA 或代谢谷氨酸受体特定亚型的激活（42 -48）。

概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人淀粉样蛋白β (aa1-42) 抗体包被于微孔板上，
样品和标准品中的人淀粉样蛋白β (aa1-42)会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被
洗去；加入辣根过氧化酶标记的抗人淀粉样蛋白β (aa1-42)检测抗体进行孵育。洗涤去
除未结合的试剂后，加入TMB底物溶液（显色剂）。溶液颜色与结合目标蛋白成正比；
加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清样本，组织裂解物和脑脊液；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用稀释液RD2-7稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的效期等。

优势
A. 精确度
板内精确度（同一板内不同孔间的精确度）
已知浓度的三个样本，在同一板内分别检测20次，以确定板内精确度。
板间精确度（不同板之间的精确度）
已知浓度的三个样本，在不同板间分别检测20次，以确定板间精确度。

B. 回收率
不同类型样本中掺入检测范围内不同水平的人Amyloid β (aa1-42)，测定其回收率。

C. 灵敏度
进行29次检测评估，人淀粉样蛋白β (aa1-42)的最低可检测剂量（MDD）范围为
0.762-4.73 pg/mL。平均MDD为2.33 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
该免疫测定法以模拟人淀粉样蛋白β (aa1-42)校正。

E. 线性
不同的样本中含有或掺入高浓度的人淀粉样蛋白β (aa1-42)，然后用稀释液RD2-7将样
本稀释到检测范围内，测定其线性。

F. 样本预值
注意:
所有样本需要在冰上处理.
脑脊液-在本试验中评估了购买的样本中是否存在人淀粉样β（aa1-42）。本研究中使用
的供体没有病史。
样本类型 平均检测值
(pg/mL) %可检测率 范围
(pg/mL)
脑脊液 (n=48) 373 96 ND-711
ND=未检测出

G. 特异性
检测方法识别天然和重组的人淀粉样蛋白β（aa1-42）。
以下列出的因子是在稀释液RD2-7中制备的，并进行了交叉反应性测定。在中值浓度重
组人淀粉样蛋白β对照品中制备以下因子来进行干扰检测。未观察到明显的交叉反应或
干扰。
Recombinant human： Synthetic proteins:
Amyloid Precursor Protein human Amyloid β (aa1-43)
Apolipoprotein E2 human Amyloid β (aa2-40)
Apolipoprotein E3 human Amyloid β (aa3-40)
Apolipoprotein E4 human Amyloid β (aa4-40)
human Amyloid β (aa11-40)
human Amyloid β (aa17-40)
human Amyloid β (aa22-40)
human Amyloid β [Pyr3] (aa3-40)
human Amyloid β [Pyr3] (aa3-42)
human Amyloid β [Pyr11] (aa11-40)
mouse/rat Amyloid β (aa1-40)
mouse/rat Amyloid β (aa1-42)
合成的人淀粉样蛋白β（aa1-40）、（aa1-44）和（aa2-42）的交叉反应≤0.8%。
合成的人淀粉样蛋白β（aa3-42）交叉反应约为6.6%。