SYBR(R) GREEN JUMPSTART TAQ RE

SYBR Green Quantitative PCR Protocol

12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F

real-time PCR技术的原理及应用

部位       2、SYBR Green  只有和双链DNA结合后才发荧光 3、变性时，DNA双链分开，无荧光 4、复性和延伸时，形成双链DNA， SYBR Green 发荧光，在此阶段采集荧光信号。 PCR反应体系的建立及优化:  1、SYBR Green 使用浓度:太高抑制Taq酶活性，太低，荧光信号太弱，不易检测 　　2、Primer：引物的特异性高，否则扩增有杂带，定量不准 　　3、MgCl2的浓度:可以降低到1.5mM,以减少非特异性产物　　4、反应Buffer

实时荧光 PCR 技术：比你想象的更丰富！

面未结合双链 DNA 时，仅产生很少的荧光，当它结合双链 DNA 时，就发射出很强的荧光信号。由于 SYBR Green I 能和任何双链 DNA 结合，无法区分引物二聚体或非特异性扩增产物，一般需要配合熔解曲线分析来排除假阳性。 图二. SYBR Green I 作用原理 TaqMan 探针 TaqMan 探针是一个与模板特异性结合的荧光探针，它的 5' 端标记有荧光报告基团 (Reporter, R)，3' 端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q)。当探针完整的时候，荧