膜电位荧光探针DiBAC4(3)

膜电位荧光探针DiBAC4(3)

产品优势  

电位依赖性分布：探针的跨膜分布随膜电位变化而改变，并伴随荧光强度变化。

响应速度较慢（秒至分钟级），适合监测非兴奋性细胞的缓慢膜电位波动。

信号幅度大，灵敏度高（荧光变化显著，远高于快响应探针的1%/mV）。

产品介绍

DiBAC4(3)是一种高灵敏度的慢响应膜电位探针。DiBAC4（3）是一种敏感的慢反应探针，用于测量细胞膜电位。这类慢响应探针通过膜电位依赖性的跨膜分布变化来产生荧光信号改变，其光学响应幅度显著大于快响应探针（通常快响应探针仅产生每mV1%的荧光变化）。这类慢响应探针（包括阳离子型碳菁染料、罗丹明类染料等）特别适用于检测由呼吸活动，离子通道通透性，药物结合和其他因素引起的非兴奋性细胞的平均膜电位变化。

产品说明书

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞以40,000至80,000个细胞/孔/100μL在96孔板中培养过夜，或对于384孔板以10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和MP染料加载溶液（参见下面的步骤2.2），125,000至250,000细胞/孔/100μL，96-以及聚赖氨酸d板或30,000至60,000个细胞/孔/25μL的用于384孔聚赖氨酸d板。在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm 离心板2分钟。

注意：每个细胞系应在个人基础上进行评估，以确定最佳的细胞密度为细胞内钙动员。

 

2.准备DiSBAC2（3）染料加载溶液（1板）：

2.1在高质量无水DMSO中制备10至30 mM的DiSBAC2（3）原液。应及时使用原液; 任何剩余的溶液需要被等分并冷冻在< -20℃。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

2.2制备2X DiSBAC2（3）染料加载 溶液： 在实验当天，将DiSBAC2（3） 固体溶解在DMSO中或将等分试样的DiSBAC2（3）储备溶液解冻至室温。用0.04％的制备的在Hanks（HHBS）20至40μM和20mM Hepes缓冲液或者缓冲您的选择，pH为7的2X工作溶液到0.08％的Pluronic ® F-127（目录＃20053）和2mM 锥虫红Plus （Cat＃2456）。通过votexing很好地混合它们。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

3.运行膜电位测定：

3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）DiSBAC2（3）染料加载溶液（来自步骤2.2）加入细胞板中。

注1：如果您的筛选化合物干扰g rowth培养基和血清因子，在添加DiSBAC2（3）染料加载 溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。

注2：染料加载后不要洗涤细胞。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30至60分钟。

注意：在室温下孵育30至60分钟可能会更好。

3.3使用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度（Cat＃21414）进行膜电位测定。

注意：在实验之前运行信号测试很重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使其信号测试强度在7,000到10,000左右。

百萤生物公司简介
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