钙离子指示剂EGTA, AM CAS 99590-86-0

钙离子指示剂EGTA, AM

简要概述

关键参数

分子量：668.6

溶剂：DMSO

消光系数：N/A

产品介绍

EGTA AM是EGTA的细胞膜渗透性衍生物，作为一种可穿透细胞的钙离子螯合剂，常用于调节细胞和组织内的钙离子浓度。EGTA属于氨基多羧酸类螯合剂，与EDTA相比，EGTA对镁离子的亲和力较低，因而对钙离子具有更高的选择性。这一特性使其特别适用于模拟活细胞环境的缓冲溶液体系，因为在活细胞中，钙离子浓度通常比镁离子低至少一千倍

EGTA四价酸结合钙离子的pKa为11.00，但由于质子化形式对结合作用影响甚微，因此在pH7条件下，其表观pKa降至6.91。

产品说明书

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM EGTA AM * CAS 99590-86-0 *储备液。
2.1EGTA AM * CAS 99590-86-0 *使用量：1 mg
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg EGTA AM * CAS 99590-86-0 *与747.83μL无水DMSO混合。

3.使用10μMEGTAAM * CAS 99590-86-0 * 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1EGTA AM * CAS 99590-86-0 *的最终孔内浓度：5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度：0.04％
3.3最终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μLEGTAAM * CAS 99590-86-0 *，25.6μL10％Pluronic®F-127和256μL25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议EGTA AM * CAS 99590-86-0 *的最终浓度为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMEGTAAM * CAS 99590-86-0 *，0.04％Pluronic？F-127,1mM丙磺舒。

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = / nm运行实验。