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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-15℃以下，避光防潮
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Amplite® Colorimetric Biotin Quantitation Kit
- 库存：
1
- 供应商：
西安百萤生物科技有限公司
Amplite 比色法生物素定量试剂盒
| 货号 | 5522 | 存储条件 | f/l |
| 规格 | 200 Tests | ||
| Ex (nm) | 500 | Em (nm) | |
| 分子量 | 溶剂 | ||
适用范围
用于生物素-蛋白偶联物中生物素与蛋白质的摩尔比，也用于溶液中生物素浓度的定量分析
产品介绍
亲和素/链霉亲和素与生物素的相互作用是已知最强的蛋白质-配体非共价生物结合（解离常数Kd=10⁻¹⁵ M⁻¹），每个亲和素分子可特异性结合四个生物素分子。这种结合具有三个显著特征：1）结合过程极其迅速；2）一旦形成复合物，其结构稳定性极高，不受pH值、有机溶剂及其他变性剂的影响；3）这种结合具有本质不可逆性，只有通过破坏蛋白质亚基结构才能释放已结合的生物素分子。
这种独特而强大的相互作用，生物素及其衍生物与各种亲和素的紧密结合特性已被广泛应用于多种生物学领域。Amplite®比色法生物素定量检测试剂盒正是利用这一原理，开发出了便捷的生物素定量解决方案。该试剂盒可精确测定生物素-蛋白偶联物中生物素与蛋白质的摩尔比，也可用于溶液中生物素浓度的定量分析。
Amplite®比色法生物素定量检测试剂盒采用HABA（4'-羟基偶氮苯-2-羧酸）作为检测试剂，其与亲和素结合时会产生显著的光谱变化。当生物素存在时，会竞争性取代HABA-亲和素复合物中的HABA，导致500nm波长处的吸光度下降，通过检测这一变化即可实现生物素的精确定量。本试剂盒的最合适的检测范围为2-16μM，支持比色皿和微孔板两种检测模式，为研究人员提供了灵活的实验选择。
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文献和实验参考文献
Detection of protein carbonyls by means of biotin hydrazide-streptavidin affinity methods
Authors: Hensley K.
Journal: Methods Mol Biol (2009): 457
Detection and quantitation of the activity of DNA methyltransferases using a biotin/avidin microplate assay
Authors: Liebert K, Jeltsch A.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 149
Quantitation of biotin-binding immunoglobulins G, A, and M in Human Sera Using F(ab')2anti-human immunoglobulin-coated microplates
Authors: Muratsugu M, Yazawa A, Fujiwara S, Nishida S, Fukui T.
Journal: Biol Pharm Bull (2008): 507
Red cell volume can be accurately determined in sheep using a nonradioactive biotin label
Authors: Mock DM, Mock NI, Lankford GL, Burmeister LF, Strauss RG, Widness JA.
Journal: Pediatr Res (2008): 528
Using liposomal fluorescent biolabels to develop an immunoaffinity chromatographic biosensing system for biotin
Authors: Ho JA, Hung CH.
Journal: Anal Chem (2008): 6405
、稳定性等性能会优于科研试剂盒。 Q2：试剂盒能否分次使用？没有用完的试剂组分如何存放？ A2：试剂盒可以分次使用。我们的酶标板条是可拆卸的，您可以根据实验需求，确定每次实验所需的酶标板条数量及各试剂组分含量。 溶解后的标准品，建议以最高浓度/母液，分装保存于 -20℃ 条件下，避免反复冻融，半个月内使用有效。 生物素化抗体工作液及 HRP 酶结合物工作液需现配现用。未用完的浓缩液及其他组分，需要按照说明书要求，分别及时地保存于 2~8℃/-20℃ 条件下，一般可存放 6 个月。 样本 Q1
发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1．准备工作： A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。 2．样本处理： A、悬浮细胞 1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数
蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量；为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量；为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。现今有很多商品化的蛋白定量试剂盒，如BCA定量试剂盒等，操作起来，简便快捷。当然也有不少实验室，还是采用传统的方法进行蛋白定量。现将蛋白定量过程中所遇的一些问题小结一下。Q1: 采用考马斯亮蓝G5-20
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