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- 文献和实验
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- 保质期:
2年
- 库存:
10000
- 供应商:
上海信裕
- 保存条件:
37度
培养基的配置:基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml 冻存液的配置:DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超净工作台常规配置 移液器1套(2.5μl、20μl、200μl、1ml),酒精灯1盏,液器1台,斜架1台,酒精喷壶1个,酒精棉球缸1个,污缸1个, 常规耗材:培养瓶(50㎝2),定量移液管(5ml、10ml),枪头(1ml、200μl、10μl),培养皿,6/24/48/96孔板,医用脱脂棉球,保种管 所需试剂:gibco高糖培养基,胎牛血清,双抗,DMSO,胰酶,苯扎溴氨,75%酒精…… 紫红曲霉实验前准备: 所需的各项高压后的耗材放于超净工作台内,用酒精喷壶喷洒实验台面,并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。 首次传代前细胞的复苏,首先用一大烧杯盛满37℃的温水放于液氮罐旁边,待细胞株取出后留上端1/3于37℃水面上尽最大速摇动管使其在2min内迅速融化。若种管顶部含有冻存的细胞液在摇动期间用力甩动使其降于管底后再摇动。这一过程可在超净工作台外操作。
细胞培养应注意的问题:
细胞培养过程中,从实验室的设计到实验过程中的操作,都需要严格控制无菌。由于细胞对于生长的条件比较苛刻,所以无论从实验室的设计,还是使用的物品及细胞培养的操作过程,都要注意保持无菌环境。
冷冻保存细胞之方法:
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30~60分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。 紫红曲霉冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度:
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial,融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
应如何避免细胞污染:
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。紫红曲霉主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
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文献和实验真菌门、子囊菌纲、散囊菌科。菌丝体发达,分枝繁茂,菌丝有隔。繁殖方式有无性和有性两种类型,但有性生殖仅见于极少数种类,最普遍的是进行无性生殖。正因如此,也有人常将曲霉放在半知菌纲中。无性生殖时,从菌丝体上产生大量的分生孢子梗,梗端膨大成球形的泡囊,从泡囊表面呈辐射状生出1层或 2层小梗,在小梗顶端各产生一串分生孢子,小梗若为 2层时,仅外层小梗顶端产生分生孢子。曲霉的种类也不少,不同的种其分生孢子的颜色也不同,有黑、黄、绿、白等各种各样,并由此形成各种色彩的菌落。少数种类已发现进行有性
一种结合蛋白,由视黄醛(也称网膜素, retinal)和视蛋白( opsin)结合而成。视黄醛由维生素 A氧化而形成,是维生素 A的醛化合物,有多个同分异构体(此处主要为两个)。在视紫红质内与视蛋白结合的为分子构象较为卷曲的一种,即 11-顺视黄醛( 11-cisretinal),在光照下它即转变为构象较直的全 -反视黄醛( all-trans retinal)。全 -反视黄醛能进而引起视蛋白分子构象改变,并开始和视蛋白部分分离,以后又在酶的作用下继续分离,直至分解
异视紫红质 isorhodopsin 由视蛋白和 9-顺式视黄醛构成的视物质。在低温下照射视紫红质,或用强的闪光照射,从退色过程的中间体可生成异视紫红质。与从同种视蛋白生成的视紫红质相比,它在 10毫微米以上的短波长方面有一吸收极大值,消光系数为 1.14倍,而光感度约弱 1/3。
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