Hap1, Ms x Hap1-100uL

包埋前免疫纳米金单重染色

免疫纳米金染色与免疫胶体金―银法染色基本相似，也可分为包埋前染色和包埋后染色。下面分别介绍包埋前免疫纳米金单重染色和与免疫酶染色结合的双重染色基本程序： 包埋前免疫，纳米金单重染色按以下步骤进行免疫染色： 1. 含1％正常血清或1%BSA的PBS预孵育20～30分钟； 2. 特异性第一抗体4℃孵育24～48小时后PBS漂洗3次，每次10分钟； 3. 纳米金标记IgGFab，片段(1：100，Nanoprobes)室温孵育2小时或4℃孵育12小时后PBS漂洗3次，每次10

包埋前免疫纳米金单重染色与免疫酶染色结合的双重染色基本程

金标记IgGFab，片段(1：100，Nanoprobes)室温孵育2小时或4℃孵育12小时后PBS 漂洗3次，每次10分钟，PB漂洗2次，每次10分钟; 4. PB配制的1%戊二醛固定30分钟～2小时，随后PB漂洗2次，每次10分钟; 5. 4℃下银加强漂洗缓冲液漂洗2次，每次10分钟; 6. 4℃下银加强10―15分钟(避光); 7. 4℃下定影液中定影10分钟后PB漂洗2次，每次10分钟; 8. PB配制1%锇酸后固定30―60分钟;PB漂洗

交联染色质免疫共沉淀（X-ChIP）实验设计

洗脱液，接着按照3.2b进行）2a.加入2ulRNaseA(0.5mg/ml).加热至65°C摇晃4-5小时或者过夜以逆转交联。DNA采用PCR纯化试剂盒中厂家说明进行纯化。样品冻存于-20°C.样品之所以加入RnaseA是因为高浓度RNA会在使用PCR纯化试剂盒时干扰DNA的纯化。而纯化柱子的饱和度是既定的。2b.加入5ul蛋白酶K(20mg/ml).加热至65°C摇晃4-5小时或者过夜以逆转交联。采用酚/氯仿抽提的DNA使用乙醇沉淀于10ul的糖原(5mg/ml).中。100ul水重悬浮。样品