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- 保质期:
1年
- 库存:
10000
- 供应商:
上海信裕
- 保存条件:
室温保存
产品包装:试剂盒组成 D1800-50 D1800-100 储存条件
RNase A 1ml 2ml -20℃
蛋白酶K 1ml 2ml -20℃红细胞裂解液 120ml 一站式PCR-SSCP套装120ml×2 RT
溶液A 15ml 2 5ml RT溶液B 15ml 25ml RT
漂洗液 15ml 15ml×2 RT洗脱液 15ml 30ml RT
吸附柱 50个 100个 RT收集管 50个 100个 RT说明书 1份 1份 RT
注意事项:
1、本试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DN**段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物的全血如人全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。一站式PCR-SSCP套装
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的 pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率。
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文献和实验液),然后在缓冲液中央加入PCR扩增产物。按照经验,扩增效果在琼脂糖胶上能看出比较亮的带的样品加1ul,效果很好加0.5ul,如果不太好就适当增加1.5、2或3不等,同时加大上样缓冲液的量,比如加3ul的PCR产物,缓冲液加到8ul变性效果更好。 4. PCR产物变性。加好的样品进行离心,使样品集中在管底。PCR仪上95变性5-10分钟,立即取出PCR产物连同架子一同置于冰上静置5min,以免变性的产物复性。 *注:3和4步可以在制SSCP胶第四步后,等胶凝的过程中进行。 二. 制胶
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PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上,短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象,一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构,这种二级结构依赖于其碱基组成,即使一个碱基的不同,也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速,因而被广泛用于未知基因突变的检测。用PCR-SSCP法检测小于200bp的PCR产物时,突变检出率可达70%-95%,片段大于400bp时,检出率仅为50%左右,该法可能
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