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细胞衰老的研究只是整个衰老生物学(老年学,人类学)研究中的一部分。所谓衰老生物学(biology of senescence,或称老年学,gerontology)是研究生物衰老的现象、过程和规律。其任务是要揭示生物(人类)衰老的特征,探索发生衰老的原因和机理,寻找推迟衰老的方法,根本目的在于延长生物(人类)的寿命。
多细胞有机体细胞,依寿命长短不同可划分为两类,即干细胞和功能细胞。干细胞在整个一生都保持分裂能力,直到达到最高分裂次数便衰老死亡。如表皮生发层细胞,生血干细胞等。
大鼠滑膜细胞死亡是细胞衰老的结果,是细胞生命现象的终止。包括急性死亡(细胞坏死)和程序化死亡(细胞凋亡)。细胞死亡最显著的现象,是原生质的凝固。事实上细胞死亡是一个渐进过程,要决定一个细胞何时已死亡是较困难的。除非用固定液等人为因素瞬间使其死亡。那么,怎样鉴定一个细胞是否死亡了呢?通常采用活体染色法来鉴定。如用中性红染色时,生活细胞只有液泡系染成红色,如果染料扩散,细胞质和细胞核都染成红色,则标志这个细胞已死亡。大鼠滑膜细胞凋亡(apoptosis)是一个主动的由基因决定的自动结丛生命的过程,所以也常常被称为程序化细胞死亡(programmed cell death,PCD)。凋亡细胞将被吞噬细胞吞噬。这一假说是基于Hayflick界限提出的:1961年Hayflick根据人胚胎细胞的传代培养实验提出。指细胞在发育的一定阶段出现正常的自然死亡,它与细胞的病理死亡有根本的区别。细胞凋亡对于多细胞生物个体发育的正常进行,自稳平衡的保持以及抵御外界各种因素的干扰方面都起着非常关键的作用。例如:蝌蚪尾的消失,骨髓和肠的细胞凋亡,脊椎动物的神经系统的发育,发育过程中手和足的成形过程。
细胞的常规观察:
细胞接种或传代以后,实验者每天或至多间隔1~2d,要对细胞做常规性检查。观察细胞形态和生长情况以及培养的pH变化、有无污染等。根据细胞动态变化,做换液或传代处理,如发现异常情况应及时采取措施。
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文献和实验一、SD大鼠的麻醉 1、SD大鼠腹腔麻醉 把异氟烷和脂肪乳混合做成乳化异氟烷,腹腔注射,3分钟麻醉,30分钟清醒。 乳化异氟烷制备:用30%的脂肪乳为载体,在室温下(20℃)应用玻璃瓶法,配制成8%的乳化异氟烷。即将1.2ml的液态异氟烷和21.3ml的30%脂肪乳加入至一个气密性良好的25~30ml玻璃容器内,在振荡器上以2000r/min的速度剧烈震荡30s,静置30s,然后再以2000r/min速度剧烈震荡50min,达到平衡后放置于4℃冰箱保存备用。 乳化异氟烷,大鼠
我养过人类原代滑膜细胞,探讨传代经验:其实最好还是在细胞长满时、还没有接触性抑制之前传代为好1、预温0.25% trypsin, 0.02%EDTA2、用Ca-free的PBS洗涤贴壁细胞三次3、用1份0.25% trypsin, 0.02%EDTA和3份PBS室温下消化(不要用全量消化液因为对于细胞的悬浮作用不但未见有增强作用而且对细胞本身没有好处)4、在倒置显微镜下观察细胞悬浮情况,约有半数以上细胞开始漂浮就用移液管(滴管)移出,置入离心管中5、离心1000rpm,10min6、上清液移回
大鼠麻醉后,背部脱毛,于 T9-T11 胸椎区域消毒,划约 2-3cm 纵行切口,咬除椎板,暴露硬脊膜,将大鼠固定于多功能鼠固定台,应用脊髓打击器撞击骨髓(打击高度 12mm,重量 10g)大鼠出现尾部痉挛性摆动,表明造模成功。造模后,对各组大鼠进行脊髓损伤的行为学评分,利用斜板实验评测动物脊髓损伤后神经功能恢复情况,分析在脊髓损伤不同时期的变化规律。
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