核蛋白抽提试剂盒

核蛋白提取试剂盒
核蛋白提取试剂盒说明书
货号：R0050
规格：50T/100T
产品内容：
试剂盒组成 50T 100T
浆蛋白抽提试剂 25ml 50ml
核蛋白抽提试剂 5ml 10ml
PMSF 300ul 1ml


保存：核/浆蛋白抽提试剂 4℃保存，PMSF 于-20 ℃保存。

产品简介：
本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约 60 分钟
就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot等实验。本试剂盒通过浆蛋白
抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细
胞核蛋白。本试剂盒可以抽提 50/100 个样品（每个样品约 2×10 6 个Hela细胞，40mg） 。

操作方法：
对于体外培养细胞：
1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF的最终浓度为 1mM。PMSF需现
用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT至终浓度 0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA消化后吹打下细胞（最好
不用胰酶硝化，以免过度消化蛋白） 。500 g离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，500 g离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．按照每 20ul细胞沉淀加入 200ul浆蛋白抽提试剂的比例加入裂解液（2×10 6 个细胞约 20ul或 40mg） 。
5．最高速剧烈涡旋 15 秒，使细胞完全分散开。若沉淀没有完全分散，可以适当延长涡旋时间。
6．500 g离心 2～3 分钟，去上清。
7．加入浆蛋白抽提试剂 200ul，最高速剧烈涡旋 5 秒，冰浴 10 分钟。
8．最高速剧烈涡旋 5 秒，4℃ 12000～16000g离心 10 分钟。
9．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可进行后续的PAGE、Western,但蛋白浓度很低，可能需要浓缩。
10．完全吸尽残余的上清，避免细胞浆蛋白污染，加入 100ul核蛋白抽提试剂。
11．最高速涡旋 15 秒或用移液器吹打至完全分散,放回冰浴中 5 分钟，4℃12000～16000g离心 10 分钟。
12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。
对于组织样品：
把组织称重后，切成细小的碎片，按每 50mg组织加入 500ul 浆蛋白抽提试剂的比例加入裂解液，在PBS
里面匀浆制成细胞悬液，把匀浆液转移到塑料离心管内接上述步骤 5。

注意事项：
1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公
司生产的BCA蛋白定量试剂盒(货号PC0020)测定蛋白浓度。
2．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
3．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。

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参考文献：
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