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完整的小鼠天冬氨酸转氨酶(AST)ELISA试剂盒包含以下各组分:已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);酶标记的抗原或抗体(结合物);ELISA试剂盒酶的底物;阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考尺度品和控制血清(定量测定中);酶联物(结合物)及标本的稀释液;洗涤液;酶反应终止液。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。疫吸附剂已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的前提下一般可保留6个月以上。可作ELISA中载体的材料良多,最常用的是聚苯乙烯。ELISA试剂盒以含铁的磁性微粒作为ELISA固相载体,反应后用磁铁的吸引进行分离,洗涤利便,ELISA试剂盒一般均配以特殊仪器。为比较不同固相在某一ELISA测定中的优劣,可应用如下的试验:用其他免疫学测定方法选出一个典型的阳性标本和阴性标本,将它们进行一系列稀释后,在不同的固相载体上按预定的ELISA操纵步骤进行测定,然后比较结果。小试管还可以当作比色杯,小鼠天冬氨酸转氨酶(AST)ELISA试剂盒最后直接放入分光光度计中比色。间接包被的抗原经固相抗体的亲和层析作用,包被在固相上的抗原纯度大大进步,因此含杂质较多的抗原也可采用捕捉包被法,试验的特异性、敏感性均由此得以改善,重复性亦佳。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的机能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍留存原来的免疫学活性,加之它的价格低廉,所以被普遍采用。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用力。控制反应前提,使各孔读数在吸光度0.8左右。所有单个读数与全部读数的均数之差,应小于10%。例如,在检测抗DNA抗体时,需用DNA作为包被抗原,而普遍的固相载体一般不能直接与核酸结合。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在特制的比色计上迅速读出结果。换言之,包被等于抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大,这种载体就是这一ELISA测定项目的最合适的固相载体。ELISA载体的外形主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。良好的ELISA板应该是吸附机能好,空缺值低,孔底透明度高,小鼠天冬氨酸转氨酶(AST)ELISA试剂盒各板之间、统一板各孔之间、统一板各孔之间机能相近。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于最佳反应状态,因此珠式ELISA的反应往往更为敏捷。IgG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力,其联结多发生在Fc段上,抗体结合点暴露于外,因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。
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文献和实验小鼠 天冬氨酸氨基转移酶(AST) 酶联免疫 分析( ELISA ) 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。 实验原理 : 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 小鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST) 水平。用纯化的 小鼠天冬氨酸氨基转移酶(AST) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 天冬氨酸
±1)° ,相对湿度 30%~60%,12h 光照 /12h 黑暗,动物自由采食和饮水。 实验试剂 检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量的试剂盒,均购自德国罗氏诊断公司,按说明书和文献报道的方法进行检测。 动物饲料 蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饲料和蛋氨酸胆碱充足(MCS)饲料,根据饲料生产公司技术人员的指导进行饲养。 动物分组 将 18 只 C57BL/6 小鼠和 18 只 SD 大鼠分别随机分成正常组(饲喂 MCS 饲料)和模型
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2,即异位表达的精氨酸脱氨酶(arcA)。对小鼠进行代谢分析的结果表明,肝细胞定向表达精氨酸脱氨酶适度但显著地增加了脂肪质量百分比,瘦体重百分比降低,此外还能够增强热量消耗。进一步的分析发现,arcA 还降低了小鼠的空腹血糖,改善了葡萄糖和胰岛素耐受。 图片来源:Cell Reports Medicine 肝脏代谢分析显示,肝细胞裂解标志物血清谷丙转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST),在 arcA 表达的小鼠中较低,而肝细胞合成功能没有受到显著影响。arcA 的表达对肝脏具有保护作用:肝脏
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