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96T/48T
海信裕生物科技有限公司悄悄告诉你:使用ELISA试剂盒要的四个方面。
第一、看似无聊实则重要的洗涤: 如果未结合的材料残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。有必要的话,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非特异结合反应。如果背景过高,而您怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。
第二、关键的封闭:封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高,怀疑封闭不充分,那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液,或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰,那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间,但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液:蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素,包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和人内切核酸酶G(ENDOG)检测试剂盒。好的封闭液应降低非特异性结合,但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。最常用的非离子型去污剂是Tween-20(恒远生物的吐温-20第二季度的新货已经上市啦,需要的来电咨询哦!)。这种封闭液便宜、稳定,在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用,因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度,它会降低特异结合,产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液,后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同,是永久的。它们与开放位点结合并封闭,同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白(BSA)、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过,它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。
第三、抗体浓度须优化: 如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。
第四、检测试剂要适量:切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高,或者未正确稀释,则会导致高背景。也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终止液。如果您的人内切核酸酶G(ENDOG)检测试剂盒不幸地遇到了高背景,那么也无需太担心,依次查看ELISA系统中的组分,并排除可能存在的问题。悉心优化,相信很快就会有漂亮的结果。
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文献和实验和caspase-9与衔接蛋白酶活化因子1(adaptor molecule apoptotic protease-activating factor l,APAFl)的相互作用而诱导凋亡。颗粒酶的这种作用可被病毒产物crmA所抑制。 3)通过释放线粒体凋亡诱导因子(apoptosis-inducingfactor,AIF),使线粒体失能,继而诱导内源性核酸酶G(endonuelease G,EndoG)活化,引起caspase非依赖途径的细胞凋亡。这种作用不被病毒产物crmA所抑制
蛋白的损失。 如何进行柱上酶切 柱上酶切纯化路线比较简单,只需上样后加入蛋白酶,在合适的温度下进行孵育一段时间,经过清洗便可得到纯度较高的无标签的目标蛋白。 去除标签的关键在于选择高效的蛋白酶并构建相应的氨基酸识别序列。下表展示的是几种常见的内切酶及对应酶切位点。 组氨酸标签由于分子量小通常不需要去除。如有必要,可使用 TEV 蛋白酶去除组氨酸标签。由于TEV酶带有六组氨酸标签,因此可实现柱上酶切而得到高纯度无标签的目标蛋白。 PreScission
(一) 原理 细胞凋亡的发生,是由于钙- 镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA , 产生180bp ~200bp 或其倍数的核小体片段。而核小体由于与组蛋白H2A 、H2B 、H3 和H4 形成紧密复合物而不被核酸内切酶切割。采用双抗体夹心酶免疫法,应用小鼠抗DNA 和抗组蛋白的单克隆抗体,与核小体片段形成夹心结构,可特异性检测细胞溶解物中的核小体片段。 (二)材料与试剂 1 .采用Boehringer
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