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- 2025年07月16日
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96T/48T
海信裕生物科技有限公司悄悄告诉你：使用ELISA试剂盒要的四个方面。
第一、看似无聊实则重要的洗涤： 如果未结合的材料残留在微孔板中，那么它会增加背景噪音。有必要的话，可增加洗涤液中的盐浓度，这会阻止非特异结合反应。如果背景过高，而您怀疑洗涤不够时，可以尝试增加洗涤次数。
第二、关键的封闭：封闭液的作用是让不相关的蛋白占据微孔板中潜在的结合位点。这就降低了可产生信号的抗体非特异结合的机会。您当然也希望抗体只与目的蛋白结合吧。如果您的背景过高，怀疑封闭不充分，那么您可以尝试使用更高浓度的封闭液，或适当延长封闭时间。如果您一直被背景问题所困扰，那么也许您该花些时间来优化封闭液。这可能需要时间，但也是值得的。目前主要有两种类型的封闭液：蛋白和非离子型去污剂。您使用的类型须取决于多个因素，包括微孔板的表面试剂、吸附的抗原、您的抗体和人钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)检测试剂盒。好的封闭液应降低非特异性结合，但它不应当与抗原、抗体或检测试剂发生相互作用。最常用的非离子型去污剂是Tween-20（恒远生物的吐温-20第二季度的新货已经上市啦，需要的来电咨询哦！）。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非特异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度，它会降低特异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。蛋白封闭液则有所不同，是永久的。它们与开放位点结合并封闭，同时稳定与微孔板结合的抗原分子。常用的蛋白封闭液包括牛血清白蛋白（BSA）、脱脂奶粉、正常血清和鱼明胶。血清组分的内在多样性可使它有效拦截许多不同类型的分子相互作用。不过，它的缺点在于能与Protein A和IgG抗体相互作用。解决这个问题的一种方法是使用鸡或鱼的正常血清。
第三、抗体浓度须优化： 如果试剂稍有不同，则可能需要优化抗体的量。非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点，切勿使用过多的一抗或二抗。
第四、检测试剂要适量：切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高，或者未正确稀释，则会导致高背景。也不要显色过度，如有必要，优化一下何时应加入终止液。如果您的人钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)检测试剂盒不幸地遇到了高背景，那么也无需太担心，依次查看ELISA系统中的组分，并排除可能存在的问题。悉心优化，相信很快就会有漂亮的结果。
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文献和实验为啥吃高脂食物总停不下来？科学家发现肠道和大脑会对脂肪上瘾……
将脂肪与肠道中的其他物质区分开来。」该研究的第一作者李梦彤博士说到。 随后，研究人员尝试使用药物阻断这些细胞的活性，发现阻断来自任何一个细胞组的信号传导都可以阻止迷走神经对肠道中的脂肪做出反应。不同于肠道通过钠-葡萄糖共转运蛋白 SGLT1 感知糖信号，研究人员发现在肠道内表达的 GPR40 和 GPR120 信号可感知脂肪信号，并通过肠脑轴传递给大脑。 图片来源：Nature 「这些干预措施证实，从肠道到大脑的每一个生物学步骤对于动物对脂肪的反应都至关重要，」李梦彤博士说，「这些实验结果也为改变
配制方法如下: 取上述磷酸盐缓冲液 6.0 mL、镁钾溶液 0.4 mL、葡萄糖- 6 -磷酸钠盐溶液 1.0 mL、辅酶 II 溶液 1.6 mL、肝 S9 组分 1.0 mL，混匀，置冰浴中待用。1.3 肌动蛋白聚合抑制剂细胞松弛素 B(CytochalasinB，cytoB) 溶液用二甲基亚砜 ( DMSO) 配制适当浓度的储备液，避光冷藏保存。cytoB 的终浓度通常为 3 μg/ mL ～6 μg/mL，实验室应根据各种细胞系选择 cytoB 的适当终浓度，以达到理想的双核细胞出现
；4°C避光贮存 4.2 4-MU贮存液B(1mM)：10 μL 4-MU贮存液A；加蒸馏水10mL；4°C避光贮存 4.3 碳酸盐终止缓冲液(0.20M)：2.12g无水碳酸钠，MW=105.99；加蒸馏水至100mL 5 实验方案 为了检测报告基因中的4-MU，产生β-Gal的细胞需先裂解并和合适的底物共同孵育。商业化的β-Gal报告基因检测试剂盒通常会有处理方案、组织特异的信号增强
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