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联硕生物
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瓶
应用
纯乙醇(分子生物学级)可用于:
核酸和蛋白质的沉淀和纯化。
准备染色和染色试剂的组织学。
包埋前使组织脱水。
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文献和实验Demonstration of an in vivo functional beta 3-adrenoceptor in man.
S Enocksson et al.
The Journal of clinical investigation, 95(5), 2239-2245 (1995-05-01)
大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶E292对于氨基酰化活性的作用
双酶切后,嵌入表达载体pTrc-99B的NcoI和HindIII两个酶切位点间的切口内。得到的LeuRS 6个变种酶基因的正确性用DNA测序证实。 2. LeuRS及其变种酶基因的表达和纯化 1) 将含有LeuRS及其六个变种酶LeuRS-E292K,LeuRS-E292F,LeuRS-E292S,LeuRS-E292D,LeuRS-E292Q,LeuRS-E292A的基因的重组质粒转化到在大肠杆菌菌株TG1中,挑选含有正确质粒的转化子至5 mL氨节
】1. 消化缓冲液:100 mM NaCl,10 mM Tris.Cl (pH8.0) 25 mM EDTA (pH8.0),0.5% (w/v) SDS,0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存;2. 将 200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮,然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h
,4℃ 离心 5 min) 5.取上清,加入 2/3 倍体积的-20℃ 预冷异丙醇, 混匀, 静置约 30 min 6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用 75% 乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗 1 次, 吹干,重悬于 500 mL TE 中 7.加入 1 ul RNaseA(10 mg/mL),37℃ 处理 1 hr 8.用酚(pH8.0): 氯仿: 异戊醇 (25:24:1) 和氯仿: 异戊醇 (24:1) 各抽提 1 次(10,000 rpm
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