0.5ml螺口棕色可立冻存管

细胞的冻存和复苏

检查，随时补充，绝对不能挥发干净，一般30立升的液氮能用1～1.5月。（二）复苏1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏，内装2/3杯37℃的温水。2、从液氮中取出冻存管，迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。3、打开冻存管，将细胞悬液吸到离心管中。4、1000rpm离心10分钟，弃去上清液。5、沉淀加10ml培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养，第二天观察生长情况。三、试剂和器材器材：液氮罐、冻存管（塑料螺口专用冻存管或安瓿

细胞的冻存和复苏

液。 5、沉淀加10ml培养液，吹打均匀，再离心10分钟，弃上清液。 6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中，37℃培养，第二天观察生长情况。 三、试剂和器材 器材：液氮罐、冻存管（塑料螺口专用冻存管或安瓿瓶）、离心管、吸管、离心机 等 试剂：0.25％胰酶、培养基、含保护剂的培养基（即冻存液） 附：冻存液配制： 培养基加入甘油或DSMO，使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4℃下保存。

细胞冻存和复苏技术

步骤（一）冻存1、消化细胞，将细胞悬液收集至离心管中。2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。7、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟）→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（－30℃ 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮。注意：操作时应小心，以免液氮冻伤。液氮定期