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- xy-E11216
- 2025年12月02日
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- 文献和实验
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- 规格：
96T/48T
规格：96T/48T
方法：酶联免疫法/酶免法（ELISA）
标本：血清/血浆/细胞培养上清液/组织匀浆/组织液/尿液/分泌物
人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒注意的事项：试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。人未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标， 在坐标纸上出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与OD值计出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值 代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。
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文献和实验。ctDNA 在循环中的半衰期短，一般为 16 min~2.5 h，适用于肿瘤负荷的实时监测。我们通过对 ctDNA 序列分析可以监测肿瘤内的异质性和克隆进化，从而改善疾病控制和指导治疗决策。 2. DNA 甲基化与肿瘤 DNA 甲基化是一种共价化学变化，在高等真核生物基因组仅发生在胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（CpG）中胞嘧啶的 C5 位，胞嘧啶结合一个甲基（CH3）后形成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。该反应由 DNA 甲基转移酶催化，CH3 基团来自s-腺苷甲硫氨酸。这些二核苷酸
脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变（见图1），行PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶，最后,对PCR产物进行测序并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化。此方法是一种可靠性及精确度很高的方法，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的克隆测序,过程较为繁琐、昂贵[27]。 图1：重亚硫酸盐处理过程示意图。DNA经重亚硫酸盐处理后，甲基化的胞嘧啶不变，未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶 2.2.3 甲基化特异性的PCR（methylation
2.2.10 DNA微阵列法 Yan等2001年[40]将以分子杂交为基础的微阵列技术应用于DNA甲基化检测中，这种方法是基于杂交的寡核苷酸微阵列，是一种在基因组中寻找新位点的方法。包括用于整个基因组范围内扫描的差异甲基化（DMH）杂交（Huang等1999年[41]）和用于检测某个位点的甲基化特异性微阵列MSO（Gitan等2002年[42]）。前者类似于mRNA表达谱或cDNA微阵列，是CpG岛微阵列，后者类似于寡核苷酸微阵列，是针对CpG二核苷酸位点的甲基化特异性寡核苷酸微阵列[26
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