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文献和实验r/min)20rain,除去其中少量的沉淀物,装入透析袋中,再置于烧杯中,用pH8.0缓冲盐水透析(0~4~C)过夜。⑤过柱 取透析过夜的标记物,通过葡聚糖凝胶SephadexG-25或G—50柱,分离游离荧光素,收集标记的荧光抗体进行鉴定。洗脱液:0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2);过滤量:12ml标记全球蛋白液(过滤前未透析);收集量:20ml(稀释1.7倍左右)。2.Chadwick法(1)试剂和材料 抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%碳酸钠水溶液、0.01mol/L
6 10 14000 16 25 14000 22 34 14000
铵溶液,边滴加边摇匀,然后置于2到8摄氏度静置2小时。 将步骤e中的待分离物于离心机内离心,8000r/min离心15到20分钟,除上清。 将步骤f中离心后的沉淀用1ml 0.01M PBS 溶解, 转移到MD 14000透析袋内,用0.01 M PBS进行透析,透析4次以上,每次至少1小时以上。 2.正辛酸-饱和硫酸铵沉淀法该纯化方法原理是:正辛酸在偏酸条件下,能与抗血清中或者小鼠腹水中的杂蛋白结合,在等电点附近将其沉淀,IgG类抗体则存在于上清液中,再利用饱和硫酸铵沉淀法即可进一步提纯。 具体
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