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文献和实验ml of X-gal staining buffer with 1 mg/ml X-gal (make 40mg/ml stock in DMF, store at -20OC; don't use if discolored). Incubate at 30OC for 24 -48 hrs, or less if expression is strong 5. Clear in acetone, rehydrate and stain in carmine alum O/N.
将其稀释至 1 mg/mL 以降低缓冲体系中去污剂的浓度（但对于那些在细胞中表达水平较低的蛋白而言，10 mg/mL 这样更高的浓度可能对免疫沉淀更有效一些）。 加入推荐体积的免疫沉淀抗体至 500 µL 细胞裂解液中与目标蛋白反应。（抗体的最适用量要根据每一细胞模型中免疫沉淀靶蛋白的数量来确定）。 将细胞裂解液与抗体轻轻混匀后孵育 2h，或 4℃ 缓慢振荡过夜。（选择孵育 2h 常用于免疫沉淀与激酶或磷酸酯酶作用的活化酶。）加入100 µL Agarose protein A+G 轻轻振荡 1h
个细胞。考虑到我们后续还要对酶切用量进行优化，实际准备了足量细胞（每组约 1.5×107 个细胞）。在我们实验前，我们仔细观察了细胞的状态和密度，细胞状态很健康，贴壁良好，也达到了 80% 左右的汇合率，一切都符合 ChIP 实验的要求。拿出试剂盒，我们首先对各种标配试剂置于冰浴中进行了标记。由于试剂盒标配的 DTT 为干粉，因此我们需要配制 1M DTT 溶液（具体地，192.8 mg DTT#7016 加 1.12 ml dH2O，确保 DTT 完全溶解）。然后，我们取出并室温预热 200
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