600目细胞筛

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

剪剪成小颗粒。 取 2.5 mL注射器活塞，用软头打圈方式研磨组织，研磨至筛网上无明显的组织块为止，取新鲜的 1640培养基或者 PBS 冲洗筛网 2~3 次。 将获得的细胞悬液用 200 目细胞筛网过滤。 收集细胞悬液，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，并调整细胞浓度至 1×107/mL。 注意事项： 肿瘤体积一般不超过 1000 mm3，肿瘤质量在 0.6~0.8 g 之间。（若肿瘤较大下述各反应体系加倍）。 酶消化法剪刀剪碎肿瘤的标准为，其可被1 mL 的枪头自由吸取

细胞内细胞因子染色步骤

一、样本准备 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300g 离心 5 min，弃上清。 向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含1%BSA的PBS)，用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL。 三、设置实验分组 根据实验设计，设置实验分组，每管加入 100μL 细胞悬液。 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗

鼠肝细胞原代培养实验方法

一、 实验材料： 6-8周龄大小鼠；剪刀，镊子，灌流用针头，连接管，玻璃平皿，细胞筛，冰盒 二、实验方法： 1. 培养用液 洗涤培养基：DMEM 基础培养基：DMEM/F12 2. 消化用液 前灌流液T1 ;后灌流液T2 3. 培养基本操作方法 a. 将小/大鼠进行麻醉，待其进入深度麻醉状态后迅速将其固定于解剖板上，于超净台中解剖，暴露肝脏； b. 沿肝门静脉插管固定，灌流前灌流液T1（37℃下预热），流速5ml