结晶紫

结晶紫染色测定细胞数

孔 6 个， 3 个阳性对照孔各加 0.1ml 含 4 μ g TNF 的 RPMI-1640 培养液， 3 个阴性对照孔各加 100 μ l RPMI-1640 培养液。继续培养 18 ～ 24 小时。 3． 甩去培养液，用 PBS 小心洗涤一次，每孔加 0.1ml 10 ％甲醇溶液固定细胞 30 秒钟。 4． 吸去甲醇溶液，每孔加 0.1ml 结晶紫染液，室温中放置 20 分钟。 5． 轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或 37 ℃烘干

结晶紫染色法测定细胞数

TNF的RPMI-1640培养液，3个阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18～24小时。 3．甩去培养液，用PBS 小心洗涤一次，每孔加0.1ml 10％甲醇溶液固定细胞30秒钟。 4．吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml结晶紫染液，室温中放置20分钟。 5．轻轻甩去染色液，用蒸馏水洗涤各孔，将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。 6．测定前，每孔加0.1ml 33％醋酸脱色，充分振荡后在570

结晶紫法检测TNF的生物活性

～100倍。利用染料结晶紫或MTT可使活细胞染色，再用脱色液将染料脱出，测定其OD值，即可反应细胞的存活状态或TNF对L929细胞的杀伤率，通过计算细胞死亡率，并与sTNF标准品对照，即可检测待测样品sTNF活性单位。 二、材料和试剂 1. L929细胞株（存活率应＞95%） 2. TNF标准品：作倍比稀释（100 U/ml～0.1 U/ml）。 3. 待测样品：作倍比稀释至少6个不同稀释度。 4. 0.25%胰蛋白酶 5. RPMI-1640培养液及PBS