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- 2026年01月20日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 抗原来源：
rabbit
- 是否单克隆：
多克隆
- 抗体英文名：
Donkey anti-rabbit IgG,IgG
- 供应商：
佰泰科
- 宿主：
ot
- 级别：
亲和纯
- 库存：
大量
- 应用范围：
,
- 适应物种：
,
- 规格：
mg
本品为亲和纯化级驴抗兔IgG，效价测定（ELISA）>1：40万。与兔IgG免疫反应性良好；与人IgG、鼠IgG 等无交叉反应，可用于ELISA, IHC, Blot等科学研究实验。
聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度＞９6％。
4℃可短期存放，-２０℃分装可长期储存，避免反复冻融。
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
(1) 固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
（2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
(3)酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
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文献和实验上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 兔IgG 定量 EIA 试剂盒使用说明 原理 本实验采用双抗体夹心 ELISA 法。用抗兔 IgG 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 IgG 与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB ，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在 4 50 nm 处测 OD 值
抗TNF的抗血清（4）二抗：125I标记的驴抗兔IgG（5）未免疫兔血清（6）制备好的巨噬细胞悬液（细胞浓度为1×106ml）（7）96孔PVC板（聚本乙稀板）（8）γ-计数仪，温浴箱，刻度吸管，毛细吸管，加样器（头）三、操作步骤（1）将准备好的巨噬细胞悬液加入PVC板各孔中，0.1ml/孔，再用1%多聚甲醛固定于PVC板中，然后用PBS洗去多余的多聚甲醛；（2）设立不同倍比稀释度的TNF标准品；（3）加入3%BSA-PBS，每孔0.1ml， 37℃孵育1h，以封闭抗体非特异性结合位点；（3）加入3%BSA
FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy
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