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文献和实验液为预先优化好的混合物,通常包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、MgCl2及其他专利的添加剂。 一些专业人士坦言,对于多个指标,包括qPCR 效率、特异性、灵敏度、速度及耐受多个循环条件和样品类型,目前还尚未实现完美的平衡。大部分qPCR预混液能够在一些方面胜出,但很难是全部。如何选择最适合的那一个,小编下面给出了一些建议。 探针 还是染料? 当然,就多重分析而言,探针法是唯一选择。SYBR Green只适合单重反应。不过,SYBR Green的优势
真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
等)、miRNA 加尾法逆转录试剂盒做反转录:适用于短片段 RNA(主要为 miRNA)的加尾法。 4)qPCR 检测 采用 Umibio 2×SYBR Green qPCR 试剂:预混 ROX1 型适用于 ABI 5700 等设备、预混 ROX2 型适用于 ABI 7500 等设备。 5)数据分析:采用仪器自带的 QPCR 分析软件进行数据分析 可以看到 qPCR 检测外泌体可行且可靠,但实验过程并不简单,因此我们对经常会遇到的问题及解答也进行了整理,帮助大家更好的完成实验。 qPCR检测外泌常见问题及解决
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书,检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是,需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料,用以校正仪器系统以外的物理误差,比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的,当用此类试剂的时候,应该将 ROX 参比
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