孵育盒（避光）免疫组化用

类器官多维鉴定（基因测序等）

室温自然冷却 5min→流水冷却锅中修复液至室温→取出切片，流水冲洗干净。 4. 阻断内源性过氧化物酶：切片放入过氧化物酶阻断试剂，室温孵育 6min →PBS 3min× 3 次。 5. 一抗孵育：切片依次摆放在免疫组化孵育盒中，除去 PBS 溶液，滴加一抗， 37℃ 孵育 60min，PBS 洗涤。 6. 二抗孵育：切片上滴加酶标羊抗鼠/兔 IgG 聚合物试剂，37℃ 孵育 15min，PBS 洗涤。 7. DAB 显色：除去 PBS 溶液，滴加新鲜配制的 DAB 显色液，镜下控制显色

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化，不同点如下： 1、免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其相同。 2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定。 3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。 4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油：0.01M PBS （1：1）。条件许可，建议购买抗淬灭的封片液，使标本可以保存更久。 5、荧光抗体的孵育以及后续处理需要避光。 6、荧光抗体染色假阳性可能会多，需要分别设定阳性和阴性

免疫组化经验总结

保护抗原和固定组织作用，过氧化氢孵育时间过长易引起脱片；现用现配，配好后4 ℃避光保存。不过，现在已有"第二代即用型免疫组化试剂盒"避免内源性生物素的干扰，推荐使用。   7）血清封闭 组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合，造成后续结果的假阳性；封闭血清一般是和二抗同一来源的，血清中动物自身的抗体，预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能与一抗来源一致。一般室温 10-30 min。但也要防止封闭过度 8）一抗和二