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文献和实验自然是越贵越好，一分钱一分货，而且连接酶控制着整个分子克隆过程的瓶颈——连接，强烈建议买好的。我用过 Promega 的，还好；BBI 的凑合用。如果连长片段就加二倍的连接酶。 ● 连接时间：过夜就应该足够了，但是你要是不急着转化，放到 4 度放几天也行，我个人认为时间长只好不坏。 ● 连接温度：最适是 16℃。有人用 PCR 仪造 16℃，我用泡沫冰盒加凉水再添冰，用手感觉差不多十四五六度，然后盖盖过夜，基本上温度不太变。你若感觉好不温度，拿个温度计测也行。有人用 4 度连接
浓度及饱和湿度的恒温培养箱中悬浮培养，孵育后分别于3，6，12，24及48小时观察结果。 3.2 AO/EB染色及观察结果：取细胞悬液 100μl，加入AO/EB染料4μl混匀，置1滴于载玻片，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数200个细胞。 3.3 DNA抽提及电泳：用酚、氯仿、异戊醇抽提DNA，1.5％琼脂糖凝胶电泳(0.5×TBE缓冲液，电压30V，电泳7～8小时)，在紫外透射仪下观察结果并拍照。 结 果 Ara-C诱导HL-60细胞凋亡，在0，3，6，12，24和48
做了五个月的Western Blot ，有一点点小心得，给新手点经验． 蛋白提取： １． 总蛋白提取（胞膜，胞浆，胞核）： 组织匀浆后,15000g, 4度, 20分钟后,取上清. Buffer:NP40 750ul, 脱氧胆酸钠0.5克, SDS 0.1克, 加1*PBS 至100ml. 再加入PMSF(7.4mg/ml) 0.1ml. (现用现加) 7.4mg/ml PMSP异丙醇溶液: 取A mg PMSF 加 A/7.4 ml 异丙醇.工厂-20度储存 ２．组织膜
