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上海远慕生物
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100ml
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文献和实验法。 3 肝细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSHpx)活性的测定 先制备GSH标准曲线。弃肝细胞培养上清,加入0.2% Triton-100水溶液0.5 ml,混匀,2 min后,离心(2 500 r・min-1,10 min),取上清液(肝细胞样品)0.4 ml,另设样品空白管,非酶反应管和试剂空白管,加入各种试剂。混匀后立即计时,静置12 min后,以样品空白管调零点,于423 nm波长处读得吸光度(A)值。在GSH标准曲线上查出对应的GSH波度。GSHpx酶活力单位是在37℃,pH6.5条件
-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万 /ml 左右
分别为0.3%双氧水和0.3%Triton X-100混合而成。配制方法是先用微波加热的36 ml PBS,再接着加120 ul Triton X-100,并加热一会儿,冷却至临用前加0.4 ml 30%H2O2。4、5%羊血清或封闭血清,用PBS稀释。5、含0.03%H2O2的0.05%DAB(避光):用20×DAB(1%,10 mg/ml)5 ul+0.1 ul 30% H2O2+95 ul PBS。6、一抗用PBS稀释(也可用抗体稀释液),二抗用中杉金桥的SP染色试剂盒。7、Xylene、梯度
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