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- 2025年07月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
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4℃,8个月
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100
- 供应商：
上海远慕生物
- 规格：
500ml
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文献和实验蛋白质印迹免疫分析（Western Blot Anglysis）
冰箱贮存。 4．Tris buffer（TBS）：Tris 2.42g，NaCl 29.2g，溶于600ml三蒸水，再用1N HCl调至pH7.5，然后补加三蒸水至1000ml。 5．漂洗液（TTBS）：TBS液500ml，加Tween20 250ul。 6．封闭液：5%脱脂奶粉。 7．抗体buffer：1.5g BSA溶于50ml TTBS。 8．显色液DAB（3.3-diaminobenzidine
,500- 1000μl/瓶) ，刮落细胞，转移到Ep管。注意：冰上操作。 4.超声 10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。 5.煮沸样品5 minutes。 6.离心12000g，5 min，取上清。 7.电泳分离：上样15μl~20μl 至 SDS-PAGE 胶 (10 cm x 10 cm)电泳。 如要定量检测某蛋白的表达水平， 应用RIPA裂解液(1 ml per 107 cells/100 mm dish/150cm2 flask)裂解
，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。 8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液（用量为10 l/ml） 8.2 Aprotinin（Sigma产品，用量为30 l/ml） 8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液 （用量为10 l/ml） 9、Blotto A： 常规使用1×PBS，5% milk，0.05% Tween 20。 10
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