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生物活性
产品描述 |
CYT997作用于癌细胞系,是有效的microtubule(微管)聚合抑制剂,IC50为10-100 nM。Phase 1/2。 |
靶点 |
Tubulin |
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IC50 |
~3 μM |
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体外研究 |
CYT997(1 μM)处理A549细胞24小时,诱导微管快速重组,包括现有的微管网络遭破坏,及一些细胞质微管蛋白在菌斑处累积,导致细胞形态发生显著变化,包括粘附细胞丢失,细胞减少。CYT997作用于16种癌细胞具有毒性,IC50为作用于HepG2细胞的9 nM到作用于 KHOS/NP细胞的101 nM。CYT997有效作用于HCT15细胞, 具有多耐药机制Pgp(MDR+), IC50为52 nM。CYT997通过抑制微管聚合,使细胞周期停在G2-M分界处,且诱导磷酸化的Bcl-2增多,也提高cyclin B1表达, caspase-3激活,以及PARP的产生。CYT997处理1小时后,引起HUVEC 单层膜通透性快速且可逆的提高,IC50为~80 nM。 与CYT997破坏细胞微管蛋白相一致,CYT997有效抑制增殖,诱导细胞周期停滞,且诱导人骨髓细胞系(HMCLs)和原代MM细胞凋亡。[2] |
体内研究 |
CYT997口服处理大鼠的半衰期(2.5 小时)比静脉注射半衰期(1.5小时)稍长, 绝对口服生物有效性为50% 到70%。CYT997口服处理给药携带 PC3移植瘤的小鼠,与Paclitaxel相比,更有效抑制肿瘤生长,这种作用存在剂量依赖性。CYT997也有效作用于携带小鼠乳腺癌4T1 细胞的同位模型,这种模型有些是抗Paclitaxel治疗的。CYT997按7.5 mg/kg剂量腹腔注射给药肝转移,在第6小时显著降低血流,与CA4P按100 mg/kg剂量处理的阳性对照作用程度相似。与在体外抗骨髓瘤活性一致,CYT997每天按15 mg/kg剂量处理激进型系统性骨髓性白血病小鼠模型,显著延长寿命。 |
临床实验 |
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特征 |
不同于多种其他微管蛋白靶向药剂(MTAs), CYT997可用于口服处理,且有效作用于MDR+细胞系。 |
激酶实验
微管蛋白聚合比浊法 |
通过传统比浊法使用牛神经元微管蛋白测定CYT997作用于微管蛋白聚合的效果,在340 nm处通过测定吸光值的增高而监测微管装配。浓度不断增高的CYT997加到 100 μL 微管蛋白/GTP/甘油中。通过试管中牛微管蛋白在PEM buffer[80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA, 及5% 甘油]中37oC下温育,然后在恒温控制下使用分光光度计测定340 nm处的吸光值变化,而进行微管组装的比浊测定。 |
细胞试验
细胞系 |
DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, 和 K562 |
浓度 |
溶于DMSO,终浓度为~1 μM |
处理时间 |
~72小时 |
方法 |
使用不同浓度CYT997 处理细胞72小时。然后使用 Alamar blue或 MTT实验测定细胞增殖。MTT实验中, 每孔加入5 mg/mL MTT,实验板在37oC下温育6小时, 然后加入溶解buffer(10% SDS,溶于0.01 N HCl),使用BMG Technologies Lumistar 或Polarstar 酶标仪在620 nm处测定吸光值。Alamar blue 实验中, 每孔加入Alamar blue(10 μL/每孔),实验板在37oC下温育4小时。使用荧光酶标仪测量荧光,在544 nm处测定激发光,在590 nm处测定发射光。细胞周期分析中, 混合细胞,使用溶于PBS的70%乙醇使细胞渗透,然后在4oC温育过夜。使用碘化丙啶 (5 μg/mL) 在4oC下对RNase处理的样本(10 μg RNase/mL,在37oC下处理20分钟)染色10分钟。通过荧光激活细胞分选(FACS)分选,使用Beckman-Coulter Quanta SC MPL系统测定细胞周期变化,使用CXP软件分析。凋亡分析中,分离细胞,然后收集。使用Vybrant凋亡检测试剂盒进行Annexin染色。细胞储存在冰上,1小时内在Beckman Coulter Quanta MPL上分析。使用双通道分析测定Annexin V-阳性细胞。 |
动物实验
动物模型 |
皮下接种PC3细胞的雄性裸鼠,接种4T1细胞的雌性BALB/c小鼠 |
配制 |
在NMP/PEG300/盐水中配制 |
剂量 |
~30 mg/kg/day |
给药处理 |
口服饲喂,每天三次 |
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