SYBR GREEN II (10000×) PCR实验

SYBR Green Ⅱ 10000×，主要用于RNA、单链DNA电泳。敏感性比EB高。低毒，无致癌性。

SYBR Green II RNA染料是一种高敏感的核酸染色试剂，可以对RNA或者是单链的DNA进行染色。使用300nm透射光显影的情况下，非变性凝胶中检测核酸的灵敏度可以达到5×10-7克。与传统的EB染料相比SYBR Green II RNA染料的灵敏度更高，可以应用于杂交前RNA质量的检测，同时不会影响后续的转膜，还可应用于变形梯度凝胶电泳（DGGE）和单链构象多态性分析（SSCP）等实验。SYBR Green II RNA染料可以代替银染和EB染色，消除了银染复杂、费时的缺点；与EB染色相比，形成的SRBR Green II -RNA复合物所激发的荧光是EB-RNA复合物激发荧光的7倍。SYBR Green II RNA染料并不是特异性的结合RNA或者DNA单链，但是其对单链的结合效率是双链的约2倍，广泛的应用于RNA的质量分析中。

SYBR Green Ⅱ 10000×染色方法：

SYBR Green II RNA 染料检测核酸时即可预染也可以电泳后再进行染色。做预染使用时，取1ul贮存液加入1ml TE缓冲液或者灭菌双蒸水中混匀，再加入1ml 的6-loading buffer上样缓冲液混匀（此时溶液为1：2000稀释，即为工作液）电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后直接上样。注意：须将商品化的核酸MARKER作一定倍数的稀释（1/5-1/10），这样才能得到比较理想的结果。

电泳后染色。电泳后，在室温、避光的情况之下准备染色液。染色液要在塑料器皿中制备而不要在玻璃器皿中，因为玻璃表层对该试剂有吸附作用。

染料取出后室温放置，恢复室温后简单离心混匀。

染色液使用1×TBE缓冲液进行1：10，000稀释。如果是琼脂糖甲醛变性胶，用1×TBE做1：5，000的稀释。由于SYBR Green II RNA染色液灵敏度高，所以要选用新鲜的1×TBE缓冲液进行稀释，以免缓冲液中残存的杂质产生背景，影响实验结果。注意：为了提高染色的灵敏度，要确定缓冲液的PH值在7.5和8之间，因为SYBR Green II RNA染色液对PH敏感。

把胶放在塑料的染色容器中，加入足够染色液使之覆盖整块胶。用铝箔遮盖或者是放在暗处避光。在染色之前没有必要先将胶中的变性剂如尿素和甲醛洗出来，因为SYBR Green II RNA染色液复合物发出的荧光在甲醛或者尿素存在时不会猝灭。

在室温下轻轻摇晃凝胶。凝胶的最佳染色时间是10-40分钟，琼脂糖凝胶的最佳染色时间是20-40分钟。染色时间也可能随着凝胶的厚度和浓度变化。由于其荧光本底很低，凝胶染色后无需脱色。染色工作放在2-8°C避光保存，可以重复使用3-4次。注意：SYBR Green II RNA染色液不影响RNA向膜上的转移和northern中的后续实验。

染色胶显色和成像：SYBR Green II RNA染色液复合物所激发的荧光可以使用300nm和254nm光波照射，通过Wratten 15 滤光片检测。注意：由于荧光本底较低，所以可以通过适当延长曝光时间的方法检测痕量的核酸。

请带手套操作。

SYBR Green Ⅱ 10000×贮存

SYBR Green II RNA染色液保存于DMSO溶液中，此贮存液于保存温度为-20°C，放置于避光干燥器中，在以上条件下，可在保存一年。稀释工作液在2-8°C可以放置一周，在室温放置3-4天。

SYBR Green Ⅱ 10000×相关产品

Western blotting实验相关试剂：
SDS-PAGE电泳：
蛋白胶配置：
P1200 SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒
A1010 30%(29:1)制胶液
T1020 1M Tris-HCL (PH6.8)
T1010 1.5M Tris-HCL (PH8.8) （T8060 TRIS）
A1030 10%PAGE胶凝固剂[AP,APS]
S1010 10%SDS （S8010 SDS）
T8090 TEMED（PAGE胶促凝剂）
A1025 40%(37.5:1)制胶液
S1051 4×SDS-PAGE 分离胶缓冲液（PH=8.8）
S1052 4×SDS-PAGE 浓缩胶缓冲液（PH=6.8）
D1070 1M DTT（D8220 DTT）
蛋白预制胶
PG00810-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度8%
PG01010-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度10%
PG01210-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度12%
PG01510-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度15%
PG41510-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度4-15%
PG42010-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 浓度4-20%
PG01215-S Precast-Gel变性蛋白预制胶 12%, 15孔
PG41515-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度4-15% 15孔
PG42010-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度4-20%
PG41510-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度4-15%
PG01010-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度10%
PG01210-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度12%
PG01510-N Precast-Gel非变性蛋白预制胶 浓度15%

蛋白电泳：
PR1300 超低分子量蛋白Marker
PR1400 低分子量蛋白Marker
PR1500 次高分子量蛋白Marker
PR1600 预染低分子量蛋白Marker
PR1700 预染次高分子量蛋白Marker
PR1800 Western blotting 蛋白Marker
PR1910 彩虹180广谱蛋白Marker（11-180KD)
PR1920 彩虹245广谱蛋白Marker （11-245KD)
PR1930 彩虹245plus广谱蛋白Marker（5-245KD)
PR1950 彩虹130广谱蛋白marker（15-130KD）
P1015 4×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P1016 4×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）
P1017 4×非变性蛋白上样缓冲液
P1018 2×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P1019 2×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）（B8120 溴酚蓝 G8190 甘油 S8270 蔗糖）
M8210β-巯基还原剂
T1070 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（G8200 甘氨酸）
P1300-500 考马斯亮蓝快速染色液（C8420 考马斯亮蓝G-250、C8430 考马斯亮蓝R-250）
P1305 考马斯亮蓝染色套装（染色液+脱色液）
R8070 剥离硅烷
B8150 亲和硅烷

转膜：
印记膜：尼龙膜、PVDF 膜、硝酸纤维素膜（NC 膜）
YA1711 硝酸纤维素膜NC膜（0.45um）
YA1701 PVDF膜（0.45um）13.25*15cm
3030 3MM 滤纸
P0012 10×丽春红（P8330 丽春红S）
D1060 10×电泳转移缓冲液

封闭、抗体孵育：
T1080-500 20*TBS
T1081-500 10*TBST
T1085-500 1*TBST（T8220 吐温 -20）
SW3010 膜封闭液
SW3015 5%BSA 封闭液（A8010、A8020、126575 牛血清白蛋白BSA）
D8340 脱脂奶粉
C8200 酪蛋白
SW3020 膜再生液

抗体：一抗、二抗
SE 系列 HRP 标记二抗、SF 系列FITC 标记二抗
SH1 酶标记亲和素HRP 、SHB2 生物素化羊抗人IgG
A1800 抗体稀释液（普通型）
A1810 一抗稀释液
A1820 HRP 标记抗体稀释液
A1830 AP 标记抗体稀释液
A1840 荧光抗体稀释液

Western信号检测：
PR1100 BCIP/NBT 地物显色试剂盒（B8090 BCIP、N8140 NBT）
A2010 AEC 显色试剂盒（20×）（A5754 AEC）
DA1010 DAB 显色试剂盒（20×）（D8230 DAB-4HCL）
PE0010 ECL Plus超敏发光液
PE0020 West Pico ECL超敏发光液
PE0030 West Femto ECL超敏发光液
SW1010 Western blotting（小鼠IgG）DAB 法显色试剂盒
SW1020 Western blotting（兔IgG）DAB 法显色试剂盒
SW1030 Western blotting（山羊IgG）DAB 法显色试剂盒
SW1040 Western blotting（小鼠/兔IgG）DAB 法显色试剂盒
SW2010 Western blotting（小鼠IgG）ECL 化学发光法检测试剂盒
SW2020 Western blotting（兔IgG）ECL 化学发光法检测试剂盒
SW2030 Western blotting（山羊IgG）ECL 化学发光法检测试剂盒
SW2040 Western blotting（小鼠/兔IgG）ECL 化学发光法检测试剂盒
YA0370 显影粉
YA0380 定影粉
YA0381 柯达定影液
YA0371 柯达显影液
YA0860 暗盒 5*7
YA0870 高速增感屏 5*7
YA0360 胶片 5*7