产品简介:
Taq Plus DNA Ploymerase 是 Taq 酶和 Pfu 酶的混合物,既有 5’→ 3’核酸外切酶活性,又有 3’→5’核酸外切
酶活性。Taq Plus DNA Ploymerase 兼具 Taq DNA Ploymerase 的高效率及 Pfu DNA Ploymerase 的高保真性的特
点。与 Taq 酶相比,Taq Plus DNA Ploymerase 具有扩增长度增加(对模板有效扩增长度可达 10kb)、保真度好等
优点;与 Pfu 酶相比,具有扩增速度快、反应效率高的优势。常用于一些对保真度要求高和模板结构复杂(如
GC 含量高、有二级结构等)的 PCR 扩增。其 PCR 产物可直接进行 TA 克隆,如需提高克隆效率,建议先纯化,
加 A 后再进行 TA 克隆。
活性定义:
1 单位(U) Taq plus DNA Polymerase 活力定义为在 74℃,30 分钟内,以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为
模板,将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制:
SDS-PAGE 检测 Taq plus DNA Polymerase 纯度大于 99%;经检测无外源核酸酶活性;PCR 方法检测无宿
主残余 DNA;能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。
酶 酶 贮存 缓冲液:
20mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 100 mM KCl ; 50% glycerol;其他成份。
适用范围:
用于 DNA 的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平
等。
建议PCR体系(以 50μl反应体系为例)
Template <0.5μg
上游引物(10μM) 1μl
下游引物(10μM) 1μl
10×Buffer(含Mg 2+ ) 5μl
dNTP(各 2.5mM) 4μl
Taq plus DNA Polymerase 0.5-1μl
ddH2O up to 50μl
注意事项:
1、PCR 反应体系加样时,最后一步加入 Taq Plus DNA Ploymerase,整个过程宜在冰上操作。
2、取 Taq DNA Ploymerase 做 PCR 反应时,请用高压灭菌处理过的吸头。
3、10×Taq Plus Buffer中含 15 mM Mg 2+ ,如PCR反应需要较高Mg 2+ 浓度,请另行加入。
4、一般情况下,Taq Plus DNA Ploymerase 可以很好地扩增 10kb 以下的片段。能否成功扩增更长的片段,主要
与模板的结构和引物的设计有关,如果扩增长片段有困难,最好选用 Long Taq DNA Ploymerase。
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