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Strep-Tactin Superflow Plus (10 ml)
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文献和实验(hematopoietic stem cells) 和CD279 (PD-1)。 · 将孵育好的样品加入到 1 ml 的 Strep-Tactin®TACS 琼脂糖层析柱上(柱子最大结合能力:1 x 108个细胞)。 · 当样品完全进入柱子后,加入 10 ml Buffer洗脱两次,就可以得到未结合的细胞了。后续使用流式细胞术检测富集的 NK 细胞。 (此处用到的试剂见文末) 结果与讨论 通过使用阴选将非目的细胞去除后,获得了高纯度的目的细胞群。实验用到了 Strep-Tactin®TACS 琼脂糖层析
下,经过快速的洗脱步骤,得到高纯度、高浓度的目标蛋白 (> 95%) 。 Strep-Tactin® 与 Strep-Tactin®XT 纯化流程的差异主要在于: 将靶蛋白从 Strep-Tactin®XT 洗脱时,需使用含有 50 mM Biotin (生物素) 的 Buffer BXT (由于亲和力大幅提升,Desthiobiotin 不能有效的洗脱靶蛋白。) 再生 Strep-Tactin®XT Superflow® 填料时,需使用 10 mM NaOH (因使用生物素进行洗脱
后将其移除。 纯化原理 Strep标签纯化蛋白质的技术原理,是利用自然界中最强的非共价作用之一:生物素(biotin)和链霉亲和素(streptavidin)之间的相互作用。将链霉亲和素改进后,就得到了非常稳定的Strep-Tactin®。Strep-Tactin®同样也是一种蛋白质,能高效且可逆的结合短肽标签Strep-tag®,而且它保留了结合生物素的能力。当生物素加入时,会作为特异性的竞争剂,用于洗脱Strep-tag®标签蛋白。 标签-配体 搭配Strep标签进行蛋白纯化的配体有2种
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