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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
88
- 供应商:
澳培赛生物科技(上海)有限公司
- 细胞类型:
原代细胞
- 物种来源:
人
- 细胞形态:
见详情
- 器官来源:
人
- 生长状态:
见详情
- 规格:
5×10⁵Cells/T25培养瓶
| 一、细胞基本属性 | |
| 细胞名称 | 人颈动脉内皮细胞 |
| 组织来源 | 颈动脉组织 |
| 商品货号 | ORCH372 |
| 种属来源 | 人 |
| 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
|
细胞简介
|
颈动脉存在于脊椎动物颈部的动脉。有颈外动脉和颈内动脉, 前者分布至头顶部 和颜面部, 后者进入颅内分布至脑和眼眶内。内皮细胞层是血液和其它组织的天 然屏障。内皮细胞功能病变是造成动脉粥样硬化的主要原因。内皮细胞同时会合 成和分泌凝血和纤维蛋白溶解系统的增强和抑制物,以及影响血小板粘附和聚集 的媒介物。它们同时也会分泌控制细胞增殖的蛋白来维持血管壁的健康。内皮细 胞会分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及响应TNF-α,继而分泌细胞因子GM-CSF ,表达ICAM-1表面抗体, 产生大量的一氧化氮和endothelin。原代动脉内皮细 胞的体外培养系统有助于在特定的体外条件下研究血管内皮细胞的功能。 |
| 培养基 | 原代内皮细胞培养体系 |
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 生长特性 | 贴壁培养 |
| 细胞形态 | 上皮样,多角形细胞 |
| 传代特性 | 细胞特性确定传代 |
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 | 气相: 空气,95%;CO2 ,5% |
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下,建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中,用PBS清洗细胞培养瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm离心3min,弃上清,收集细胞沉淀;
3)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4)若遇到悬浮细胞团块较大,无法机械吹散时,向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中,用吸-管轻轻吹打混匀,37°C温浴2-3min,消化结束后,加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化,用吸管轻轻吹打,分散细胞;1200rpm离心5min,弃上清,收集细胞沉淀;
5)加入5ml新鲜完全培养基,用吸管轻轻吹打混匀;按传代比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
6)待细胞状态稳定后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和澳睿赛技术部沟通;由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,详尽告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
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文献和实验脉根。其它的高等脊椎动物的大动脉根,在第三、第四大动脉弓之间消失,所以,其第三大动脉弓形成纯粹的颈动脉。在相当于第三、第四大动脉弓之间的腹行大动脉的部分称为颈总动脉干( common co-rotid trunk);高等脊椎动物,是由颈总动脉干分为左、右颈总动脉,然后再各分支为颈外动脉和颈内动脉。
,所以从感受器的性质,它是血管壁牵张感受器。压力感受器对搏动性的压力变化比非搏动性的压力变化更敏感,此特点与正常机体内动脉血压的搏动性特点是相适应的。在主动脉弓、胸部升主动脉及颈总动脉等的管壁中都有压力感受器,在颈动脉窦管壁内的称为颈动脉窦压力感受器(sinus-baroreceptor)。
重要的化学感受器,为扁圆形小体,直径3~5毫米,位于颈内、颈外动脉分叉处的后方,借结缔组织连于动脉壁上。颈动脉体由上皮样细胞组成,细胞间分布着许多窦状小动脉,神经末梢膨大,呈网状分布在上皮样细胞上,能感受血液化学成分的变化,颈动脉体接受动脉小分支的血液供给,是全身血液供应最丰富的器官,每百克组织,每分钟约2400毫升,这样,小体组织的需氧量和二氧化碳产生量相对于血流量都是很小的,流入和流出小体的血液中的氧分压、二氧化碳分压和H 浓度变化极微,这就保证其细胞所接触的内环
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