hPCGF1基因敲除株（HT-29细胞）

一、产品概述

hPCGF1基因敲除株（HT-29细胞） 是 上海淳麦生物科技有限公司 构建的 PCGF1 基因敲除稳转细胞株，宿主/载体细胞为 HT-29。该产品基于 "PCGF1 功能研究" 需求定向构建，即购即用，可显著缩短研究者自行构建基因编辑细胞株的周期（常规自建需 2-4 个月）。

二、产品名称与长尾关键词

核心检索词：PCGF1 基因敲除细胞株、PCGF1 knockout cell line、HT-29 PCGF1 KO、PCGF1 稳转细胞、CRISPR PCGF1 基因敲除、PCGF1 功能研究模型。

三、核心参数

四、产品特点

• PCGF1 靶向基因敲除，构建与鉴定围绕该基因位点展开
• 以 HT-29 为宿主背景，便于在熟悉细胞体系中开展机制研究
• 组织来源 结直肠，适配相应组织背景的功能与机制研究
• 冻存管规格发货，复苏后即可进入实验，便于批次管理与保种
• 适用于功能缺失（loss-of-function）机制研究与 rescue 回补实验
• 连续传代后敲除表型稳定，批次间一致性可控
• 配套敲除效率与移码突变验证报告，便于实验设计

五、适用范围

本 PCGF1 基因敲除稳转细胞株主要用于 PCGF1 基因功能缺失（loss-of-function）研究，通过表型对比解析 PCGF1 的生物学功能与调控机制；适用于 rescue 回补实验（回补野生型验证表型归因）、信号通路解析、药物靶点确证与慢病毒包装等场景。宿主细胞 HT-29 便于在熟悉背景下开展机制研究。

六、构建与验证原理

采用 CRISPR/Cas9 系统针对 PCGF1 基因外显子设计 sgRNA，由 Cas9 核酸酶引入 DNA 双链断裂（DSB），细胞经非同源末端连接（NHEJ）修复时产生移码性插入/缺失（indel），使 PCGF1 阅读框提前终止，实现稳定敲除。单克隆经 PCR 扩增靶区段并 Sanger 测序鉴定等位基因突变，确认敲除效率后连续传代验证表型稳定性（HT-29 背景，货号 SHA-KO-0293）。

七、细胞培养方案建议

1. 复苏：自液氮取出 PCGF1 基因敲除株冻存管，37℃ 水浴轻柔晃动至完全融化，转入预温培养基后 100×g 离心 5 分钟洗去 DMSO，重悬接种（HT-29 常规 1–3×10⁵ cells/cm²），于 37℃、5% CO₂ 条件下静置培养，24 小时后首次换液以去除未贴壁细胞与碎片。
2. 培养条件：使用含 10% 胎牛血清（FBS）的完全培养基，可选添加青霉素-链霉素双抗；每 2–3 天换液一次，弃去 1/2–2/3 旧液后补充新鲜完全培养基。
3. 传代：传代时弃旧液、PBS 洗涤后以 0.25% Trypsin-EDTA 37℃ 消化，HT-29 通常 1–3 分钟即可脱壁；含血清培养基终止后轻柔吹打成单细胞悬液，离心重悬并按 1:3–1:6 分瓶，吹打力度不宜过大以免机械损伤。
4. 倍增与接种：HT-29 常规每 2–4 天传代一次，具体依倍增时间（多数 18–48 小时）与接种密度调整；长期过度汇合会改变细胞形态与基因表达谱，应及时分瓶。
5. 冻存：冻存取对数期细胞，冻存液推荐 90% FBS + 10% DMSO 或商业无血清冻存液，细胞密度 1–3×10⁶ cells/mL，程序降温盒 -80℃ 阶梯降温过夜后转入液氮长期保存，避免 4℃ 以上长时间停留造成冰晶损伤。
6. 状态复核：连续传代 5–10 代后建议复核 PCGF1 的基因敲除状态（敲除株以 PCR/测序、过表达株以 qPCR/WB），确认 HT-29 细胞中目标位点/表达水平未发生漂变。

八、保存与运输

本产品（PCGF1 基因敲除株，货号 SHA-KO-0293）以冻存管形式交付。冻存管收到后若暂不复苏，应立即转入液氮保存，切勿在 -20℃ 或 4℃ 长时间放置；运输采用干冰保温并全程冷链，到货后请尽快按第七部分方案复苏或转入液氮保存，避免反复冻融影响 HT-29 细胞活性与 PCGF1 编辑状态。

九、常见问题（FAQ）

• 能否用本株做 rescue 回补实验？
  可以。PCGF1 敲除株（货号 SHA-KO-0293）适合作为回补实验的受体细胞，转入野生型 PCGF1 表达载体后比较表型，有助于确认表型归因于 PCGF1 缺失而非脱靶效应。
• PCGF1 敲除后是否完全无蛋白表达？
  CRISPR/Cas9 移码敲除通常导致功能蛋白缺失，但需以 Western blot 在本实验体系中实测确认；建议用识别不同表位的抗体验证 PCGF1 蛋白水平，并关注是否存在截短产物。
• 可传代多少代？
  建议尽早代次（如 P5 以内）使用以减少遗传漂变；长期传代需定期做 STR 鉴定与功能复核，确认身份与表型稳定。
• 如何判断与处理支原体污染？
  建议每 1–2 月用 PCR 法筛查支原体；一旦阳性应丢弃并彻底消毒超净台与培养箱，必要时以支原体清除试剂处理周边细胞，避免交叉传播影响实验。
• 与自建细胞株相比优势？
  即购即用，省去 2-4 个月自建与验证周期，批次一致性更可控。

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十一、产品质控与售后

PCGF1 基因敲除细胞株由 上海淳麦生物科技有限公司 供应，敲除株附靶位点 PCR 扩增与 Sanger 测序验证说明（确认移码突变与敲除等位基因），本产品仅限科研用途，不用于临床诊断或治疗。运输采用干冰/冰袋保温，到货后请按规范复苏；如有质量问题请于签收后规定时间内与售后联系（货号 SHA-KO-0293，规格 T25/冻存管）。