即用型 DRAQ7 死细胞 DNA 染料(0.3mM)

Ready-to-use DRAQ7 Dead Cell DNA Dye（0.3mM in Water）

即用型 DRAQ7 死细胞 DNA 染料(0.3mM)

 

目录号：C88868

规格：50μL/0.5mL/1mL

保存：4℃避光保存，冰袋运输。

产品简介:

DRAQ7是一款明亮的远红外亲脂性非膜透性蒽醌类DNA染料，其核心作用原理为通过特异性结合死细胞或透化细胞的细胞核DNA实现靶向标记，无法穿透完整活细胞的细胞膜，可以精准区分膜完整活细胞与膜受损死亡细胞。相较于死细胞标记染料PI与7-AAD，DRAQ7具备性能优势在于：激发波段覆盖广，发射光位于远红区域，不被紫外线激发、与PE及PE同系物无发射光谱重叠，可直接替代PI与7-AAD并规避其光谱交叉干扰的弊端；染色过程无需RNase处理以排除RNA干扰，也无需额外洗涤步骤，大幅简化实验流程；染料在细胞长期培养中无毒性，可保障实验样本的活性与后续研究的可行性。

DRAQ7凭借独特的标记特性与光谱优势，成为细胞凋亡、细胞活力及膜完整性研究的关键工具，因无长期毒性，DRAQ7还可作为药物筛选、细胞培养等实验的终点检测指标，用于评估不同处理条件下的细胞健康水平，为药物毒性、环境因子影响等研究提供可靠的细胞活力数据，其低干扰、高适配的特性有效突破了传统染料的应用局限，推动细胞死亡相关研究的精准化与高效化。
注：效能等同于ThermoFisherDRAQ7™染料（D15106）。
注：本文中DRAQ5、DRAQ7均是BiostatusLimited的商标及注册商标。

产品组成：

注：规格是按照DRAQ7母液1︰100稀释，工作浓度3μM，稀释后96孔板检测单次用量100μL来计算。

应用范围：

死细胞核酸检测，细胞凋亡，死细胞区分，多色共染分析等。

产品特点：

极速染色：室温最快10min快速染色，大幅缩短实验时间；

免洗涤：染色后无需洗涤，方便使用，省时间省步骤；

方便使用：以易用的水溶性形式提供，按需稀释后即用，使用方便；

适合多色搭配：无紫外激发且发射光谱与PE无重叠，和PE搭配做凋亡检测时，无须设置单染管调节补偿；

超稳定：在室温下稳定，具有高度的热稳定性和光稳定性。

产品参数：

Ex：599/644nm；

Em：678/697nm；

光谱图：

使用方法（仅供参考）：
一、实验前准备

试剂准备：

将试剂从储存条件（如4°C）取出，平衡至室温（15-25°C）。

准备细胞培养基、缓冲液（如PBS）。

对照设置

阴性对照：活细胞，新鲜完全培养基培养正常培养的细胞，作为标定“DRAQ7^-活细胞”的荧光基线。

阳性对照：死细胞，55-60℃无菌蒸馏水孵育10min（诱导完全细胞死亡），标定“DRAQ7⁺死细胞”。

仪器准备：

荧光显微镜：配备633nm或647nm光源的荧光显微镜。

流式细胞仪：可用633nm波长激发的流式细胞仪。

二、操作步骤

方案一：荧光显微镜检测（适用于悬浮细胞）

收集与洗涤细胞：

（1）收集待测悬浮细胞悬液至离心管中。

（2）1000rpm，室温离心5min，小心吸弃上清液。

细胞重悬与计数：

使用PBS或细胞培养基重悬并细胞计数。

取5×10⁴-10⁵个细胞，1000rpm低速离心5min，去除PBS或细胞培养基。

配制DRAQ7工作液：

将DRAQ7按照1∶100的比例添加至细胞培养基中（DRAQ7添加至培养基稀释比例在1︰15至1︰200之间）。
注：不同细胞种类所需DRAQ7的染色浓度可能不同，初期最好进行细胞染色的预实验工作，设置不同DRAQ7稀释倍数梯度确定最佳稀释比例。

细胞染色：

将DRAQ7染色工作液添加至沉淀中，重悬细胞，室温（20~25℃）孵育10min；

孵育结束后，1000rpm低速离心5min，去除染色工作液；

加细胞培养基重悬细胞。

注：DRAQ7孵育时间建议在10min上下摸索。
荧光显微镜检测：

（1）96孔板法：将100μL细胞悬液加入96孔板中，静置片刻，待细胞自然沉降贴底后，置于荧光显微镜下观察。

（2）载玻片法：取20-30μL细胞悬液滴加于洁净载玻片上，轻轻盖上盖玻片，避免产生气泡，置于荧光显微镜下观察。

（3）滤光片选择：Ex/Em：645/666nm。

方案二：荧光显微镜检测（适用于贴壁细胞）

1.细胞准备：

（1）提前一天在孔板中接种细胞，使得细胞汇合度达到70%-85%。

2.配制DRAQ7工作液：

（1）将DRAQ7按照1∶100的比例添加至细胞培养基中（DRAQ7添加至培养基稀释比例在1︰15至1︰200之间）。

注：不同细胞种类所需DRAQ7的染色浓度可能不同，初期最好进行细胞染色的预实验工作，设置不同DRAQ7稀释倍数梯度确定最佳稀释比例。

3.细胞染色：

（1）吸弃微孔板中的旧培养基；

（2）稀释后的DRAQ7添加至细胞中（染色工作液体积按建议添加：96孔板加100μL/孔，48孔板加150μL/孔，24孔板加250μL/孔，12孔板加500μL/孔，6孔板加1mL/孔），室温（20~25℃）孵育10min。

注：DRAQ7孵育时间建议在10min上下摸索。

4.荧光显微镜检测：

（1）直接将培养板置于显微镜下检测，光片选择，Ex/Em：645/666nm。

方案三：流式细胞仪检测（适用于悬浮细胞和贴壁细胞）

1.收集与制备单细胞悬液：

l悬浮细胞：同“方案一”中的“步骤1”和“步骤2”。

l贴壁细胞：以6孔板培养的细胞为例。

a.将细胞培养基吸出至适合的离心管内备用。贴壁细胞用少量PBS清洗一遍，清洗后的PBS吸出后同样转移到盛装培养基的离心管内，1000rpm，室温离心5min。

b.加入适量胰酶消化液（覆盖细胞即可），室温下置于显微镜下观察，待细胞变圆、间隙增大时，用移液器轻轻吹打，使细胞完全脱落。

注：胰酶使用量、消化时间、消化温度根据各自实验室的经验操作。

c.关键：加入“a步骤”离心管内备用的细胞培养基，终止消化。

d.将细胞悬液转移至离心管，1000rpm，室温离心5min，吸弃上清。

e.收集a步骤与d步骤中的细胞。

f.用PBS或细胞培养基重悬细胞并进行细胞计数。

g.取5×10⁴-10⁵个细胞，1000rpm，室温离心5min，吸弃上清。

2.配制DRAQ7染色工作液：

（1）将DRAQ7按照1∶100的比例添加至细胞培养基中（DRAQ7添加至培养基稀释比例在1︰15至1︰200之间）。

注：不同细胞种类所需DRAQ7的染色浓度可能不同，初期最好进行细胞染色的预实验工作，设置不同DRAQ7稀释倍数梯度确定最佳稀释比例。

3.细胞染色：

使用1mLDRAQ7染色工作液重悬细胞，室温（20~25℃）孵育10min。

注：Draq7孵育时间建议在10min上下摸索。

4.流式细胞仪检测：

（1）选用633nm波长激发，660nm检测荧光信号。

三、结果判读

定性分析（显微镜）：


      图1.DRAQ7染料用于Hela细胞DNA染色的荧光显微成像

死细胞：细胞核区域出现明亮的远红外（红色）荧光，信号集中且轮廓清晰，核区边界清晰；

活细胞：无核荧光，活细胞的细胞核区域无DRAQ7远红外（红色）荧光信号（因膜完整，染料无法进入）。

注：图片引自参考文献《Real-timecellviabilityassaysusinganewanthracyclinederivativeDRAQ7®》（doi:10.1002/cyto.a.22228）
定性分析（流式细胞仪）：

图2.DRAQ7染料用于胶质瘤细胞的流式细胞图
第一步：根据阴性对照和阳性对照信号值确定“DRAQ7活细胞群”的基准和“DRAQ7⁺死细胞群”的基准；

第二步：FSC-A/SSC-A散点图，圈选细胞群，排除碎片与大聚集物；

活死细胞分群

FSC-A/DRAQ7散点图：辅助确认细胞大小与DRAQ7信号的关联，排除碎片干扰，x轴：FSC-A（线性轴，反映细胞大小），y轴：DRAQ7荧光强度（双指数轴）

设定活/死阈值并圈门

定阈值：以“阴性对照（活细胞）的DRAQ7信号”为基准，找到其荧光强度的第99百分位值（即99%的活细胞信号低于该值），此值即为“活/死阈值”；

活细胞门（DRAQ7⁻）：圈选“DRAQ7荧光强度低于阈值”的群体（对应阴性对照的主要群体，信号弱）；

死细胞门（DRAQ7⁺）：圈选“DRAQ7荧光强度高于阈值”的群体（对应阳性对照的主要群体，信号强）。

注：图片引自参考文献《DRAQ7asanAlternativetoMTTAssayforMeasuringViabilityofGliomaCellsTreatedWithPolyphenols》（doi:10.21873/anticanres.14553.

常见疑问与解答：

问：DRAQ7储液是否含DMSO？

答：该产品为水溶液形式，不含DMSO。

问：染色时间在37℃和室温下为什么有差异？

答：37℃时细胞的活性和分子运动相对室温更活跃，DRAQ7与细胞核结合的速度更快，所以可能需要更短的染色时间。

问：在使用DRAQ5和DRAQ7的时候，这两者有什么区别，该如何选择？

答：对活细胞进行DNA分析、长期监测细胞状态或进行组织深层成像时选DRAQ5；评估细胞活力、检测凋亡或区分样本中的死活细胞群体时选DRAQ7。两者的区别如下：

注意事项:

DRAQ7属于远红外荧光，肉眼不可见，需要CCD相机或激光共聚焦观察。

由于DRAQ7发射和激发波长范围很宽，不建议将Draq7与其他可被488nm或633nm激光激发的远红光荧光染料联用。

荧光染料存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓淬灭。

使用前请将产品瞬时离心，再进行后续操作。

本产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请遵循您所在常规实验室安全规定。
 

备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息和纸板说明书为准。（版本V0.5）