猪（Porcine）甲基化酶(Methylase)ELISA

猪（Porcine）甲基化酶(Methylase)ELISA检测试剂盒

产品货号：DM-P5481

产品规格：48/96T

上海笃玛生物坚持技术为本、品质先行。试剂盒依托经典酶联免疫吸附实验原理搭建体系，持续优化抗体配对与反应缓冲体系，降低非特异性干扰；企业恪守标准化生产与多重出厂检测原则，兼顾技术创新与实验实用性，持续为高校实验室、科研平台提供可靠的蛋白定量检测工具。

ELISA 利用抗原与抗体特异性结合的免疫学原理，结合酶的高效催化显色反应，根据颜色深浅实现目标蛋白定量检测。

 

ELISA试剂盒的四大原理

 

试剂盒的组成：

 

ELISA 试剂盒标准操作流程（双抗体夹心法为例）

双抗体夹心法需要一对配对抗体：捕获抗体、检测抗体，两种抗体识别靶抗原上两个不同抗原表位。微孔板预先固定捕获抗体，先结合样本中的目标抗原，再结合检测抗体，形成 “夹心” 免疫复合物；借助生物素 - 链霉亲和素系统标记 HRP 酶，催化 TMB 显色，最终实现抗原定量。

样本前处理：

收集细胞培养液，转移至离心管；

3000rpm离心10min，去除细胞及碎片；

吸取上清进行检测；若不能立即实验，分装冻存于-20℃；

避免反复冻融；上清出现沉淀，检测前再次离心取上清

加样与孵育：

使用校准移液枪匀速加样，枪头垂直悬空加样，不要触碰孔壁、孔底，避免刮伤包被抗体、造成非特异性吸附；加样轻柔缓慢，孔内禁止产生气泡；气泡会导致显色不均、读数偏差、数据作废；

 

洗板（核心关键步骤）：

洗板是 ELISA 每一轮免疫孵育之后必不可少的关键操作。常规循环洗涤 4～5 次。单次洗涤只能去除一部分杂质，多次洗涤逐步降低孔内游离试剂浓度，达到理想洗涤效果。微孔板内发生抗原抗体特异性结合，但体系里还残留大量未结合的抗原、游离抗体、杂蛋白、非特异性吸附杂质。 洗板就是利用洗涤缓冲液冲洗、解离这类松散结合物质，只保留牢固结合在孔壁上的免疫复合物，最大限度降低背景信号，减少假阳性、缩小复孔误差，直接决定实验数据干净程度。

 

 

加酶结合物与二次孵育：

在完成样本孵育、洗板、加入生物素化检测抗体并充分洗涤后，微孔板内已经形成「捕获抗体—靶标抗原—生物素化检测抗体」夹心复合物。

 

二次洗板：

彻底洗脱这类游离、非特异性吸附的 HRP 酶结合物，只保留连接在靶标免疫复合物上的酶分子。 如果不进行二次洗板，游离 HRP 会直接催化后续 TMB 底物显色，造成全板背景升高、空白孔明显变蓝，出现严重假阳性，直接破坏标准曲线梯度。

 

底物显色：

底物显色推荐恒温 37℃避光孵育，该温度契合 HRP 酶最佳活性区间，保障显色速率稳定、整板反应均一。温度波动会直接改变酶促反应速度，引发显色深浅失衡，影响定量准确性。

 

终止反应与读数：

酶标仪采用 450 nm 波长检测吸光度（OD 值）。黄色越深，光吸收越强，OD 值越高。 以标准品浓度和 OD 值构建标准曲线，通过曲线方程换算，即可得到待测样本目标蛋白浓度；可选 630nm 校正波长，降低板底杂质、划痕引起的检测误差。

 

数据处理：

标准品是已知一系列梯度浓度的抗原，在同一板、相同反应条件下测得对应的 OD 值。利用标准品「浓度 —OD 值」对应关系建立数学模型，绘制标准曲线，再将样本 OD 值代入公式，反推出样本中待测物浓度，这就是 ELISA 定量的核心数据处理思路。

 

 

ELISA试剂盒核心性能评价指标：

1.灵敏度（最低检出限 LOD）： 代表试剂盒可稳定检出待测物的最低浓度。检出限越低，越能够识别样本内微量靶蛋白。灵敏度不足易导致低浓度样本漏检，产生假阴性结果。

2.线性范围： 该区间内待测物浓度与检测信号具备良好拟合关系，可实现准确定量。浓度高于区间上限，信号达到饱和无法区分；低于下限，信号贴近背景，定量失真。更宽的线性范围能够减少样本稀释复测操作。

3.精密度：分为批内（板内）精密度与批间精密度，采用高中低浓度质控样本重复检测，通过变异系数 CV 评价结果重复性。常规合格标准：批内 CV＜10%，批间 CV＜15%；CV 数值越高，数据波动越大，实验重复性越差。

4.特异性： 评价抗体只特异性识别目标抗原、不和结构相近同源蛋白发生结合的能力。交叉反应过高会带来结果虚高，引发假阳性，无法精准区分目标物质与干扰蛋白。

5.回收率：开展加标回收试验，在阴性样本基质中加入已知浓度标准品检测。回收率 = 实测浓度 ÷ 理论添加浓度 ×100%，合格区间普遍为 80%～120%，用来判断血清、组织匀浆等样本基质是否存在抑制物干扰检测。

6.稳定性：包含热加速稳定性、开瓶稳定性、冻融稳定性。模拟储存、运输、反复取用等条件测试试剂性能，对比试剂盒初始实验数据，评估货架期及运输过程中性能是否持续稳定。

 

结果计算：

读取酶标仪 OD 数值；采用双波长检测时，净 OD=OD450−OD630，消除微孔板划痕、杂质干扰。

标准品、待测样本均设置复孔，计算每组复孔 OD 平均值；计算复孔变异系数 CV，CV 过大说明操作误差大，数据议剔除或复测。

背景校正：所有标准品、样本平均 OD 减去空白孔平均 OD，得到校正净 OD 值，消除非特异性吸附背景干扰。

（此图仅供参考）

 

售后服务：

上海笃玛生物科技有限公司拥有专业的技术服务团队，为您提供全程技术支持。如您在产品使用过程中有任何疑问，或对产品质量有异议，请及时联系我们的技术顾问，我们将在24小时内响应，为您提供实验方案优化、问题排查等专业服务。

 

代测服务

货号	实验检测服务
DM-D0001	ELISA（酶联免疫吸附实验）
DM-D0002	PAS染色（过ｄｉａｎ酸雪夫染色）
DM-D0003	PCR代检测
DM-D0004	基因组测序代检测服务
DM-D0005	免疫组化/免疫荧光代检测服务
DM-D0006	液相色谱（HPLC）代检测服务
DM-D0007	生理生化检测服务

 

企业介绍：

上海笃玛生物科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。

 

总部位于上海，并在全国设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“笃玛生物”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及先进的仓储和物流系统。“笃玛生物”已经得到全国科研工作者的认可。

 

公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买笃玛生物产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。